生物血红蛋白的提取和分离新人教选修.pptxVIP

生物血红蛋白的提取和分离新人教选修第1页/共29页第2页/共29页一、基础知识：㈠ 凝胶色谱法（分配色谱法）： 1、凝胶：一些微小多孔的球体（内含许多贯穿的通道，由多糖类构成如葡聚糖、琼脂糖，具多孔的凝胶就叫分子筛） 2、概念：根据被分离物质的蛋白质相对分子质量的大小，利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，来进行分离。第3页/共29页3、原理：当不同的蛋白质通过凝胶时，相对（ ）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程（ ），移动速度（ ），而（ ）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在（ ）移动，路程（ ），移动速度（ ），相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。相对分子质量较小较长相对分子质量较大较慢凝胶外部较短较快4、具体过程第4页/共29页第5页/共29页凝胶色谱法分离蛋白质的原理第6页/共29页第7页/共29页㈡ 缓冲溶液： 1、概念：在一定的范围内，能对抗外来少量强酸、强碱或稍加稀释不引起溶液PH发生明显变化的作用叫做缓冲作用，具有缓冲作用的溶液叫做缓冲溶液。 2、作用： 能够抵制（ ）的对溶液的（ ）的影响，维持PH基本不变。外界的酸或碱PH值第8页/共29页 3、缓冲溶液的配制 通常由（ ）种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的（ ）就可以制得（ ）使用的缓冲液。1－2使用比例在不同PH范围内人体血液中缓冲液: NaH2PO4 / Na2HPO4H2CO3 / NaHCO3第9页/共29页㈢电泳：1、概念：指带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。第10页/共29页 2、原理：许多重要的生物大分子，如（ ）等都具有( ) 在( )下，这些基团会带上（ ） 。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其（ ）移动。电泳利用了待分离样品中各种分子（ ）以及分子本身（ ）、（ ）的不同使带电分子产生不同的（ ），从而实现样品中各种分子的分离。多肽、核酸可解离的基团一定的PH正电或负电所带电荷相反的电极带电性质的差异大小形状迁移速度第11页/共29页第12页/共29页第13页/共29页分类：琼脂糖凝胶电泳和聚丙稀酰胺凝胶电泳。蛋白质相对分子质量测定（ ）通常用十二烷基硫酸钠（SDS）—聚丙稀酰胺凝胶电泳第14页/共29页 蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带静电荷的多少以及分子的大小等因素。为了消除静电荷对迁移率的影响可以在凝胶中加入( )。SDS能使蛋白质发生完全变性。由几条肽链组成的蛋白质复合体在SDS的作用下会解聚成单条肽链，因此测定的结果只是( )。SDS能与各种蛋白质形成蛋白质—SDS复合物，SDS所带负电荷的量大大超过了蛋白质分子原有电荷量。因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷差别，使电泳迁移率完全取决于( )。SDS单条肽链的分子量分子的大小第15页/共29页 说明：聚丙烯酰胺凝胶电泳对分离大分子具有较高的分辨率，但核酸比蛋白质分子大得多，只能采用较大孔径的琼脂糖凝胶电泳。核酸分子本身含有大量的磷酸根，核酸带负电荷，在电场中向正极移动。溴化乙啶荧光染料对核酸染色在紫外线的照射下，发出橙红色荧光。根据荧光条带的粗细和分布的位置，可以对其鉴定。第16页/共29页琼脂糖凝胶电泳电泳检测结果第17页/共29页（四）血红蛋白在红细胞的组成中，约90%是血红蛋白。它由四个肽链组成，包括两个α—肽链和两个β—肽链。每条肽链环绕一个亚铁血红素基团，可携带一分子氧或一分子二氧化碳。血红蛋白因含血红素而呈现红色。第18页/共29页第19页/共29页二、实验操作蛋白质的提取和分离一般分为四步：（1）样品处理：包括洗涤红细胞；血红蛋白稀