核医学分子核医学.pptxVIP

核医学分子核医学;特点： 1）深入分子水平认识疾病，通过细胞信息传导、基因表达、生化代谢等多个方面，在解剖学和功能症状出现之前发现病变信息。 2）通过特定示踪剂，将疾病与基因表达的改变联系起来，提高疾病诊治的层次。 3）当代分子生物学研究成果是其理论源泉。 4）分子识别是分子核医学的理论基石。 5）生化代谢的评价是其理论重要组成部分。;二、当前的几个热门研究领域（六个领域） 1、受体显像：举例 a、b、c 2、受体介导的放射配体治疗 3、放免显像（RI I） 4、放免治疗（RIT） 5、基因显像和基因放射治疗 原理：将放素标记的反义寡核苷酸注入受试者体内，由于体内癌基因等有过度表达，通过体内核酸分子杂交而与相应靶基因结合，以定位、定量显示特异靶基因，从而进行基因诊断以及破坏相应致病基因而达到治疗的目的。 ;反义寡核苷酸基因显像剂的特点： 1）分子量小 4）无免疫原性 2）穿透力强 5）与靶结合快 3）特异性高 6）靶/非靶比值高 反义寡核酸的基本要求：P303;6、代谢显像：主要指PET 显像原理：β+衰变的放素与体内靶物质作用而损失能量被吸收、转化为二个方向相反的高能r光子。它提供了很好的空间定位信息，经计算机处理重新购成清晰的三维图像。 ;β+核素特点： 大部分为人体基本元素，全部为人工生产 湮灭辐射可获得三维图像 T1/2短，一次可给较大剂量，图像清晰 重复给药，动态观察。 临床应用举例： 18F-萄糖研究脑功能状况，老年痴呆时摄取18F-萄↓，测脑部放射性下降。 脑瘤区18F-萄↑。 ;三、分子生物学中的示踪技术及应用P271 （一）核酸标记：标记上放射性核素的又叫探针，或叫基因探针。 1、探针分类：基因组DNA探针 CDNA探针 以mRNA为模板 CRNA探针 反向合成的DNA片段 人工合成寡核…… 探针的标记物分类 放素：32P 33P 35S 3H 14C 125I等 非放：生物素、地高辛等。;两类探针的比较： ;2、核酸探针的具体标记方法： 体内标记：将32P—磷酸盐加到细胞或细菌培养体系中，使32P参入新合成的核酸分子上。 酶促法体外标记：很常用，先将核素预先标记在核苷酸上，然后利用多种核酸聚合酶将核苷酸参入到探针分子中或交换到探针分子中去。 常见的几种外标记方法： 1）DNA缺口平移法：已有试剂盒提供如Amash ema, promega, BR2等公司。 2）随机引物法：也有试剂盒上市。 ; 两种方法注意点： ①模板越小，产物的比活度越高； ②产物的长度与加入寡核苷酸引物的量成正比； ③有5种原因常引起标记碍障： a、DNA双链未充分变性； b、DNA纯度不佳； c、Klenow酶效价不够； d、DNA片段太少，G50分离时丢失； e、DNA用量过大或过少。 ; 3）单链DNA探针标记：在M13噬菌体的环状单链上合成互补DNA链时参入放素。 4）CDNA探针标记：以mRNA为模板，在引物和四种脱氧核糖核苷三磷酸（dNTP，其中一种为标记物）存在下，经酶促聚合反应合成互补标记CDNA。 5）RNA探针标记：P275 6）DNA探针的5’端标记：P275 7）DNA探针的3’端标记：P276 8）PCR-DNA标记：PCR扩增时通过合成DNA将32P-dNTP参入到DNA分子中达到标记作用。 将32P—dNTP参入到DNA分子中达到标记作用。 ;3、核酸标记的检测 核酸标记方法很多，虽已大部分商品化和标准化，但环节繁杂，试剂质量及操作等影响因素多，标记完成后应定性、定量检测。 参入核酸中的cpm 主要两个指标：参入比= -----------------------100% 加入的标记品总cpm 比活性：指每微克核酸中的放射性计数 cpm/μgDNA(RNA) ; 4、核酸标记注意事项： 1）同位素的安全防护 2）核酸原料一般用50-150ng，越少，产品比活度越高。 3）标记前体32P-dNTP，用时须真空抽干 4）使用的Ependoff管和吸头需先硅化、防止吸附。 5）标记物应及时用，-20℃可保存1~3天 6）