糖耐康对糖脂毒性诱导的胰岛细胞株.docxVIP

糖耐康对糖脂毒性诱导的胰岛细胞株 背景介绍： 糖耐康(TJ-107)是一种中药配方，由白芍、黄连、茯苓、山楂、甘草、薏苡仁等中药组成，具有调节血糖、降血脂等作用。糖脂毒性是胰岛细胞功能受损的重要原因之一，而糖耐康对糖脂毒性诱导的胰岛细胞株的影响尚不清楚。因此，本文旨在研究糖耐康对糖脂毒性诱导的胰岛细胞株的保护作用。 实验方法： 1.材料和试剂： 胰岛细胞株INS-1，糖脂毒性诱导剂(FFA+GO)、流式细胞仪、CCK-8试剂、PBS缓冲液、离心管、RIPA细胞裂解液、BCA蛋白定量试剂盒、SDS凝胶等。 2.细胞培养和糖脂毒性诱导: 使用DMEM高糖培养基培养INS-1细胞株，将细胞均匀分散于96孔板中，开始进行糖脂毒性诱导。添加FFA(200 μM)+GO(25 mM)处理INS-1细胞株，终浓度为2 mM FFA+0.25 mM GO，细胞培养12 h，24 h，48 h。 3.实验组设置和处理： 实验组分别为对照组、诱导组和糖耐康组，每组三个平行样本。对照组不添加处理剂，诱导组添加FFA+GO诱导胰岛细胞株，糖耐康组先加入0.5 μg/mL的糖耐康，1 h后再添加FFA+GO，细胞培养24 h。 4.细胞活性测定： 添加CCK-8试剂，孵育37℃，4h后，使用酶标仪测定细胞的吸光度(OD)值。 5.细胞凋亡测定： 使用流式细胞仪检测INS-1细胞株的凋亡率。取相应的细胞，离心收集，洗涤后加入1×Annexin V binding buffer(1×AVB)中，再加入Annexin V-FITC和PI染液，15 min后用流式细胞仪检测。 6.蛋白质表达分析： 采用RIPA细胞裂解液进行细胞裂解，离心收集上清液，BCA蛋白定量试剂盒检测蛋白质含量，加入融解样品缓冲液进行电泳，转移膜上，使用辣根过氧化物酶标记的抗体进行Western blot检测。 实验结果： 1.糖耐康能够保护细胞的生存性： 加入FFA+GO的诱导组的细胞活力明显下降，糖耐康组细胞活力相对较高，表明糖耐康在糖脂毒性诱导中具有一定的保护作用。 2.糖耐康能够减少细胞凋亡： 经过糖脂毒性诱导的诱导组中，细胞凋亡率明显增加，糖耐康组中细胞凋亡率明显降低，表明糖耐康能够抑制胰岛细胞株的凋亡。 3.糖耐康可以降低炎症因子表达： 经过糖脂毒性诱导的诱导组中，细胞内TNF-α、IL-6表达明显升高，糖耐康组中细胞内TNF-α、IL-6表达明显下降，表明糖耐康可以抑制细胞的炎症反应。 结论： 研究结果表明，糖耐康可以保护胰岛细胞株免受糖脂毒性诱导，其中包括降低细胞凋亡、抑制细胞炎症因子表达等作用。该研究为糖耐康开发新的临床应用提供了一定的理论依据。