干细胞示踪技术进展.pptxVIP

干细胞示踪技术进展第1页/共66页 示踪方法体外示踪（病理学示踪）体内示踪：MR、核素显像、光学成像第2页/共66页 病理学示踪移植前体外预先标记培养的干细胞，包括荧光染料标记 （标记细胞核或细胞膜） 核素标记方法 Y染色体标记报告基因转染第3页/共66页 细胞核标记物5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷 （BrdU） 标记DAPI标记Hoechst 染色第4页/共66页 BrdU标记BrdU是DNA 前体胸腺嘧啶核苷的同类物， 能与内源性胸腺嘧啶竞争性地参与1 期细胞单链DNA合成从而标记细胞核， 细胞核免疫荧光染色后利用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜发射一定波长紫外光激发后观察， 亦可通过免疫组化染色识别BrdU鉴定移植细胞。第5页/共66页 BrdU标记第6页/共66页 BrdU标记第7页/共66页 DAPI标记DAPI荧光染料化学名称为4’，6联脒-2-苯基吲哚（4’‘6-diamidino-2-phenylindole, dihydrochloride, DAPI）,能与富含A-T碱基对DNA专一结合从而标记细胞核， 紫外光激发下发出浅蓝色荧光。第8页/共66页 DAPI标记优点： （1） 荧光保持时间较长、 专一性强、灵敏度高； （2） 标记技术简单， 标记效率高。缺点：细胞分裂将导致DAPI标记强度降低、 灵敏度下降。仅适于短期定量分析。且标记的细胞死亡后可释放出DAPI， 将周