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检测原理和问题处理 ★实时荧光定量PCR检测技术(Real-time PCR) 定量PCR得数学原理 定量PCR得化学原理 定量PCR得光学原理 什么就是PCR？ PCR得反应过程 RT-PCR原理图 荧光定量PCR得数学原理1、Baseline (基线)2、Threshold (阈值)3、Threshold Cycle (CT值)4、[DNA]0 (初始模板)Threshold (阈值)[DNA]0 (初始模板)Threshold Cycle (CT值)Baseline 基线 基线 反应荧光明显增加前得背景荧光值。默认为3-15 cycles得信号值线性图谱对数图谱 阈值 阈值= 基线(背景)信号得标准偏差得10倍,即 PCR扩增信号进入相对稳定对数增长得最下限,通常设定在S型扩增曲线得增长拐点处附近。 大家有疑问的，可以询问和交流可以互相讨论下，但要小声点 Ct值 扩增反应中,当荧光信号增长到大于阈值时所对应得循环数,即PCR增长信号与 Threshold发生交汇得循环数,也就是FQ-PCR判断阴阳性和进行定量分析得依据。 [DNA]0确定初始模板得浓度初始DNA量越多, 荧光达到某一值(域值)时所需要得循环数越少Log浓度与循环数呈线性关系,根据样品扩增达到域值得循环数就可计算出样品中所含得模板量 Real