生物学做Westernblot仪器.pptxVIP

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  • 2023-06-13 发布于上海
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生物学做Westernblot仪器;化学显色法操作简便,无需暗房和显影设备,显色直观,但灵敏度较低,国外已不常见。 化学发光法(ECL)比化学显色法灵敏度高,可达pg水平。但由于是酶促反应,不同曝光时间得到的信号与样品量不成线性关系 ,不能做准确定量。 荧光法采用荧光检测原理,操作简单,荧光信号强弱直接反映目的蛋白量,可进行精确定量;还可以根据荧光染料的不同,用不同的荧光二抗可以在同一张膜上同时检测两种蛋白质。;ECL常见问题;解决方案:Odyssey;Odyssey VS ECL流程;Antigen on membrane;荧光-准确定量 ;红外荧光 VS 化学发光 定量线性范围;Odyssey系统定量的线性相关性;Dilutions of transferrin detected with rabbit anti-Tf primary and Alexa Fluor 680 goat anti-rabbit secondary. Sensitivity is 250-fold higher than reported for the Bio-Rad Molecular Imager FX with fluorescent antibodies, 100-fold higher than ECL (BioTechniques 29:636-642).;红外荧光 VS 化学发光 成像效果 ;红外+荧光 DEMO;Marker S1 S2 S3 S4;红外技术优点—低背景;红外荧光 vs 可见荧光 膜背景信号;背景更低,信噪比高,保证更好检测灵敏度 定量线性范围更宽,可达4个数量级,定量更准确 穿透力更强(活体成像的应用);Odyssey—双色同时检测; 靶蛋白+靶蛋白 核酸+结合蛋白 Marker + 总蛋白 参比蛋白 + 靶蛋白 总蛋白 + 修饰化蛋白 ;双通道同时检测;双色-ERK蛋白的磷酸化;双色-EMSA;Odyssey双色检测的优越性;In-Cell Western Assay;In-Cell Western Assay;细胞培养 Culture cells to confluency in 96-well or 384-well plates;Membrane Westerns vs ICW;EGF对ERK磷酸化水平的调控;EGF抑制剂对ERK磷酸化水平的影响;In-Cell Western 软件模块;在用客户提供的结果;Odyssey ICW 的优点;ICW相关试剂;其他经ICW验证的抗体以及kit; 应用文献一;;;左图:The effect of KSR1 phosphorylation on MEK1/2 and RSK1 activation.;应用文献二;;;蛋白质芯片扫描;小动物活体成像-双色;小动物活体成像-附件;软件功能;;Odyssey系统发表文献统计;Paper List;总 结;Odyssey 系统概况;感谢观看!

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