基因工程之基因操作的工具酶培训课件.pptxVIP

3.3 DNA聚合酶 DNA聚合酶 ：能够催化脱氧核糖核苷酸连续加到双链DNA分子引物链的游离3’-OH末端，使核苷酸发生聚合作用，而不从模板上解离。 反响特点 ： (1) 以四种三磷酸脱氧核糖核苷〔dNTP〕为底物 (2) 反响需要模板的指导，参加的核苷酸由模板链所决定 (3) 聚合反响需要有引物存在，且引物要有3’-OH游离基团 (4) DNA链的生长方向为5’? 3’ (5) 产物DNA链的性质与模板相同〔半保存复制〕; DNA聚合酶只能在已有的核酸链上延伸DNA链，而不能从无到有开始DNA链的合成。 种类 ： 到目前为止，已从E.coli 中发现了Pol I、Pol II、Pol III三种DNA聚合酶 。其中Pol I 和Pol II的主要功能是参与DNA的修复过程，Pol III与DNA的复制有关。三种聚合酶中，只有Pol I 同分子克隆关系密切。;3.3.1 大肠杆菌DNA聚合酶 I〔E.coli DNA Pol I〕 DNA Pol I是从大肠杆菌细胞中别离得到的，该酶是由单一多肽组成的球蛋白，MW=109000，直径=65? DNA Pol I已得到高度纯化，从100 kg大肠杆菌中可以别离到约500 mg纯化的酶蛋白。每个成熟的大肠杆菌细胞中约有400个分子的Pol I。;1