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- 2023-06-13 发布于陕西
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温和噬菌体:其侵入细胞后噬菌体的核酸和寄主细胞的核酸同步复制,寄主细胞不裂解,待细胞分裂繁殖时,噬菌体的核酸随寄主细胞传于下代。 1、噬菌体和转导作用 溶原细胞:含有温和噬菌体的寄主细胞 原噬菌体:溶原细胞内噬菌体核酸 温和噬菌体 λ噬菌体 插入寄主细胞特定的位点(lac位点附近) 成为染色体的附加体 P1噬菌体 独立存在于寄主细胞内,而非染色体的一部分 当插入染色体时,可以是多个位点 普遍转导(generalizedtransduction) 通过完全缺陷噬菌体对供体菌任何DNA小片段的“误包”,而实现其遗传性状传递至受体菌的转导现象,称为普遍转导。 特异转导(restricted或specializedtransduction) 指通过部分缺陷的温和噬菌体把供体菌的少数特定基因携带到受体菌中,并获得表达的转导现象。 2、转导作用的类型 因为细菌细胞置换了噬菌体的某些必要基因,形成缺陷噬菌体, 不能引起宿主细胞裂解 a b 普遍转导 在普遍转导中任何遗传标记都能从供体转移到受体。感染噬菌体的寄主细胞发生裂解,其DNA被破碎为一些小片段,小片段有的被正常噬菌体吸收,有的被转导噬菌体吸收,后者能与寄主细胞的DNA发生重组 特异性转导 特异转导是噬菌体对寄主的特定基因进行非常有效的转移。 主要是噬菌体基因组被整合到寄主细胞DNA的特殊位点上,其复制受到寄主细胞的控制。 定义:它是通过两种细菌细胞直接接触将DNA从一种细菌转移到另一种细菌。 接合转移中质粒起主要作用。 (三) 接合作用(Conjugation) 大肠杆菌的接合 1、质粒的转移 游离式的质粒含有转移基因tra,可在两个不同的细胞之间进行基因转移。大肠杆菌的F质粒的转移为例:核酸内切酶将F质粒中的DNA oriT(转移起点基因)的两股DNA链中的一股切开,这一股DNA链经由性菌毛进入受体细胞,然后配对,复制为双链DNA分子,达到了DNA的转移。 2、染色体基因的诱动转移 有些质粒(如F质粒)进入受体细胞后,整合到染色体上成为附加体,因含有tra基因,可以带动染色体基因的转移,具有诱动染色体转移的作用。 E.coli的F+ 、 F- 、Hfr和F′菌株的异同,并图示四者间联系。 E.coli分成四种相互有联系的接合型的菌株 F+菌株: 在细胞中存在着游离的F因子(1~4个),在细胞表面还有与F因子数目相当的性菌毛。当F+菌株与F-菌株相接触时,前者可通过性菌毛而将F因子转移到后者细胞内,因而使Fˉ菌株也转变成F+菌株(一般可达到100%)。 F-菌株: 在F-菌株中不含F因子,细胞表面也没有性菌毛。但它可通过与F+菌株或F′菌株的接合而接受供体菌的F因子或F′因子,从而使自己转变成“雄性”菌株,也可接受来自Hfr菌株的一部分或全部遗传信息。 Hfr菌株:(高频重组,high frequency recombination strain) Hfr菌株是其F因子已从游离状态转变成在核染色体组特定位点上的整合状态。因为Hfr菌株与Fˉ菌株接合后发生重组的频率要比F+与F-接合后的重组频率高出数百倍,所以称为高频重组菌株。 F′菌株 : 当Hfr菌株内的F因子因不正常切离而脱离核染色体组时,可重新形成游离的但携带一小段染色体基因的特殊F因子,称F′因子。具有 F′因子的菌株称为F′菌株 。 F质粒的4种存在方式及相互关系 (四) 基因转座(Transposition) 1、转座机制:转座酶能够识别反向DNA重复系列。 转座过程:识别 切割(复制) 连接 保守型:转座因子先从染色体上割裂出来,然后转移到染色 体的特别位点上,没有复制,只有一个copy。 复制型:转座子先复制一个copy,新copy 插入到染色体的 其他位点上,有两个copy。 2、转座因子的诱变作用 转座因子可以在染色体基因之间转移,也可基因内转移,因而使得该基因的连贯性受到破坏。 转座因子是获得突变子的一种便利手段。 转座诱变中常用带有抗药性基因的转座子,便于抗性菌落的筛选,还可插入其他基因作为选择标记。 Mini-mu IPTG 使受体细胞中形成β-半乳糖苷酶 诱变 X-gal 显兰色 形成不同颜色的菌落 1、新达尔文主义(无目的、随机突变) 2、适应突变(有目的、主动突变) 3、各具千秋实验证据 (五) 细菌的适应突变 第四节 重组DNA技术和遗传工程 体外重组:细胞外基因重组 体
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