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生物过程分析检测期末试题 名词解释 半抗原：只能与特异性抗体作用但不能引起机体免疫应答的简单分子成为半抗原。 热原：是由微生物代谢产生的微量即能引起恒温动物体温异常升高的致热物质。 自由电泳：又称移动界面电泳，是指在没有支持介质的溶液中进行的电泳。其装置复杂，价格昂贵，费时费力，不便于推广应用。目前主要用于样品制备和富集领域。 质反应：当一定剂量的药物给予动物体内后，观察某一反应或反应的某一特定程度的出现与否，例如死或不死，惊厥或不惊厥，只有出现与不出现两种情况，故不能用量来表示个体的反应程度，只能用一组动物中出现反应的百分率来表示群体的反应程度，如死亡率、惊厥率，这类反应称为质反应。 酶的活性中心 保留时间 最小效量 简答 1. 简述双抗原夹心法测抗体的操作步骤 答：反应模式与双抗体夹心法类似。用特异性抗原进行包被和制备酶结合物，以检测相应的抗体。操作步骤如下： 形成固相抗原； 加受检标本； 加酶标抗原； 加底物显色。 2.简述 SDS分离分析的原理 答：在SDS电泳中，由于SDS这种阴离子表面活性剂以一定比例与蛋白质结合成复合物，使蛋白质分子带负电荷，这种负电荷远远超过蛋白质分子原有电荷差别，从而降低或消除了蛋白质天然电荷的差别； 此外，由多亚基组成的蛋白质和SDS、二硫苏糖醇DTT或巯基乙醇作用后都解离成亚单位，这是因为SDS破坏了蛋白质氢键、疏水键等非共价键，DTT或巯基乙醇打开了二硫键。蛋白质的构型也发生变化（消除多肽折叠），在水溶液中SDS-蛋白质复合物都具有相似的形状，像一个长椭圆棒，使得SDS电泳的泳动率也不再受蛋白质原有形状的影响。因此，各种SDS-蛋白质复合物在电泳中不同的泳动率只反映了蛋白质分子量的不同。 3.简述区带电泳及其常见的几种类型 答：区带电泳是指由支持介质的电泳，待分离物质在支持介质上分离成若干区带。支持介质的作用主要是防止电泳过程的对流和扩散，以使被分离的成分得到最大分辨率的分离。根据支持介质差异，电泳有以下几种类型： 纸电泳 醋酸纤维素薄膜电泳 聚丙烯酰胺凝胶电泳 琼脂糖凝胶电泳 4.简述凝胶扩散法检测内毒素效价的原理 答：利用抗生素在涂布特定试验菌的固体培养基内呈球形扩散，形成含一定浓度的抗生素球形区，抑制了试验菌繁殖而出现透明的抑菌圈。通过测定固体培养基表面产生的抑菌圈大小来测定供试品的效价 论述 试述管碟法检测抗生素效价的原理和操作方法 答：管蝶法是利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用，采用量反应平行线原理的设计，比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法。 理论根据：抗生素对数剂量与抑菌圈半径平方成直线关系，抗生素的量可根据抑菌圈的大小来推算 操作方法： 将不锈钢小管安置在涂布特定试验菌的琼脂培养基平板上，当小管内加入抗生素溶液后，抗生素分子就随溶剂向培养基内呈球形扩散； 将培养基平板置培养箱中培养，试验菌就开始繁殖； 抗生素分子在琼脂培养基中的浓度，随离开小管的距离增大而降低。当抗生素分子扩散到某一时间，这时琼脂培养基中抗生素的浓度与试验菌的生长达到相互作用平衡，试验菌的繁殖被抑制而呈现出透明的抑菌圈。在抑菌圈的边缘处，琼脂培养基中所含抗生素的浓度即为该抗生素对试验菌的最低抑菌浓度； 将已知效价的抗生素标准品溶液与未知效价的供试品溶液在同样试验条件下进行培养，比较两者抑菌圈的大小； 由于同质的抗生素对特定试验菌所得的两条剂量反应曲线为平行直线，故可根据此原理，较准确地对比出供试品的效价。 试述不连续SDS的分析原理和分离过程 答：系统的不连续性表现在以下几个方面： 系统由上、下两层凝胶组成，凝胶的孔径不同，上层为大孔径的浓缩胶，下层为小孔径的分离胶。 缓冲液离子组成及各层凝胶pH不同。电极缓冲液位pH8.3的Tris-甘氨酸缓冲液，浓缩胶为pH6.7的Tris-HCl缓冲液，而分离胶为pH8.9的Tris-HCl缓冲液。 在电场中形成不连续的电位梯度。在这样一个不连续系统里，存在三种物理效应，即样品浓缩效应，凝胶的分子筛效应和电荷效应，由于这三种物理效应，使样品分离效果好，分辨率高。 计算 采用离子交换高效液相色谱法检测某一待测混合物，结果如下图所示，利用内加法进行实验设计和结果分析，请计算待测组分（峰3）的质量百分率，列出公式推导及其计算全过程，其中a图为样品色谱图，b图为内加标准品后色谱图，a图中，进样样品总质量为4ug，峰2面积为2.4 cm2，峰3面积为7.2cm2，b图中，进样内加标准品质量为0.5ug，峰2面积为2.4cm2，峰3为9.6 cm2