农业农村部公告第423号-11-2021CN.docx

ICS 65.020.01 CCS B 04 中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 农业农村部公告第423号— 11—2021 转基因植物环境安全检测 花粉活力的测定 The detection of environmental safety of transgenic plants— The determination of pollen viability 2021-05-07 发布 2021-11-01实施 中华人民共和国农业农村部发布 I 农业农村部公告第423号—11—2021 前 言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中华人民共和国农业农村部提出。 本文件由全国农业转基因生物安全管理标准化技术委员会归口， 本文件起草单位：农业农村部科技发展中心、山东省农业科学院植物保护研究所。 本文件主要起草人：徐晓辉、梁晋刚、孙红炜、魏琳岚、杨淑珂、李凡、路兴波。 1 农业农村部公告第423号— 11—2021 转基因植物环境安全检测 花粉活力的测定 1 范围 本文件规定了转基因植物花粉活力的检测方法。 本文件适用于转基因玉米、大豆、棉花的花粉活力检测。 2 规范性引用文件 本文件没有规范性应用文件。 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 花粉的萌发 pollen germination 在适宜条件下，花粉内壁穿过萌发孔向外突出，形成的花粉管长度大于花粉粒直径。 3.2 花粉活力 pollen viability 花粉具有存活、生长、萌发或发育的能力。 3.3 花粉萌发率 pollen germination rate 萌发花粉占花粉总数的百分率。 4 原理 花粉的离体萌发是模拟花粉体内萌发条件，在含有花粉萌发所需营养元素的培养基上使花粉粒萌发 并生长的一种试验方法，这种方法最大限度地还原了花粉的体内萌发和生长过程，因而常被用来检验花粉 的活力。在适宜的环境条件下，具有活力的花粉在花粉萌发培养基上，能够正常萌发和生长。无活力的花 粉则无法完成该过程。在体外培养条件下，通过测定转基因植物和其对应的非转基因对照的花粉在不同 处理条件下的花粉萌发率，可判断它们花粉活力的差异。 5 试剂和材料 除非另有说明，仅使用分析纯化学试剂和重蒸水。 5.1 花粉 选择健康的处于盛花期的转基因植株和对应的非转基因对照植株的花粉。 5.2 花粉萌发培养基 5.2.1 花粉萌发培养基要求和参考培养基 选择经试验验证的，能够使玉米、大豆和棉花花粉萌发率大于50%,并可保持完整花粉管形态的花粉 萌发培养基。 玉米花粉萌发培养基见附录 A。 大豆花粉萌发培养基见附录B。 棉花花粉萌发培养基见附录 C。 5.2.2 其他花粉萌发培养基 2 农业农村部公告第423号—11—2021 如有符合5.2.1要求的其他培养基，可替代附录中的参考培养基。 6 仪器 6.1 电子天平：感量分别为0.1g、0.01g和0.1 mg。 6.2 人工气候箱。 6.3 恒温水浴锅 6.4 显微镜和成像系统。 6.5 其他相关的仪器设备。 7 试验方法和记录 7.1 试验花粉的采集和保存 选择健康的植株用于花粉的采集。对于玉米，收集足量的处于盛花期的转基因植物和其对应的非转 基因对照的花粉，滤除杂质备用，采用定性滤纸等干性材料存放花粉，防止其结团失活。对于大豆和棉花， 采集足量正在散粉的小花，放入未完全密封的容器中，低温保存，30 min 内带回实验室进行试验。 7.2 花粉形态观察 选取转基因植物和其对应的非转基因对照植株各3株，作为3个生物学重复，收集花粉进行形态观 察。将收集的花粉均匀地散落在花粉萌发培养基上，立即用显微镜观察转基因植物和其对应的非转基因 对照花粉粒，并测量其直径大小。每株植物统计30个花粉粒的直径，3株共统计90个花粉粒的直径。 7.3 花粉的离体萌发 7.3.1 花粉的分装 玉米：将收集的转基因玉米和其对应的非转基因对照花粉分别充分混匀后各平均分为10份，每份至 少0. 1g 花粉，存于定性滤纸等干性材料中用于花粉萌发试验。 大豆和棉花：将收集的转基因植物和其对应的非转基因植物小花各分为10组，每组不少于6朵，用于 花粉萌发试验。 7.3.2 花粉的萌发和培养 初始花粉的萌发 选取转基因植物和其对应的非转基因对照花粉各1份(或小花各1组),立即分别均匀地洒落(或涂 抹)到3个花粉萌发培养基上，置于铺有一层湿润滤纸的大培养皿中培养[温度(28±2)℃,湿度70%~ 85%],2h 后置于显微镜下观察每个培养皿中