农业农村部公告第423号-12-2021CN.docx

ICS 65.020.01 CCS B 04 中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 农业农村部公告第423号— 12—2021 转基因植物环境安全检测 抗虫植物对非靶标生物影响 二斑叶螨 The detection of environmental safety of genetically modified plants— Effects of insect-resistant plants on non-target organisms— Tetranychus urticae 2021-05-07 发布 2021-11-01实施 中华人民共和国农业农村部发布 I 农业农村部公告第423号— 12-2021 前 言 本文件按照 GB/T1.1—2020 《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中华人民共和国农业农村部提出。 本文件由全国农业转基因生物安全管理标准化技术委员会归口 本文件起草单位：农业农村部科技发展中心、中国农业科学院棉花研究所、山东农业科学院植物保护 研究所。 本文件主要起草人：雒璃瑜、刘鹏程、崔金杰、梁晋刚、张帅、朱香镇、张开心、马艳、李东阳、王丽、姬继 超、姜伟丽、路兴波。 农业农村部公告第423号— 12-2021 转基因植物环境安全检测 抗虫植物对非靶标生物影响 二斑叶螨 1 范围 本文件规定了抗虫转基因植物对二斑叶螨(Tetranychus urticae)影响的检测方法。 本文件适用于抗虫转基因棉花、玉米和大豆对二斑叶螨影响的检测。 2 规范性引用文件 本文件没有规范性应用文件。 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 抗虫转基因植物 insect-resistant transgenic plants 利用基因工程技术把抗虫基因导入受体植物基因组获得的具有抗虫性状的植物。 3.2 死亡率 mortality 死亡的受试生物个体数占总受试生物个体数的比率(%)。 4 原理 将室内饲养的二斑叶螨初孵幼螨人工转接在抗虫转基因植物上饲养。以抗虫转基因植物对应的非转 基因植物为对照，饲养一定时间后，观察抗虫转基因植物及其对应的非转基因植物上二斑叶螨的存活情 况，并计算死亡率，评估抗虫转基因植物对二斑叶螨的影响。 5 试验材料 5.1 试验材料 抗虫转基因植物材料及其对应的非转基因植物材料。 5.2 试验生物 二斑叶螨为在实验室内饲养2代以上、遗传背景相对一致，且近2代内未接触过任何化学农药或抗虫 转基因植物材料的种群。选择二斑叶螨初孵幼螨(卵孵化后24 h 内)用于生物测定试验。 6 主要仪器 6.1 人工气候室或温室。 6.2 解剖镜。 6.3 其他相关的仪器设备。 7 试验步骤 7.1 试验设计 7.1.1 处理组：抗虫转基因植物材料。 7.1.2 阴性对照组：对应的非转基因植物材料，不喷施任何化学农药。 7.1.3 阳性对照组：对应的非转基因植物材料，以农药推荐剂量的中剂量喷施杀螨剂。 2 农业农村部公告第423号— 12-2021 7.1.4 每处理不少于3次重复，每重复5株植株。 7.2 试验操作与记录 7.2.1 试验在人工气候室或温室中进行，温度为(26±1)℃,相对湿度为(60±10)%,光周期为16 h:8 h (L:D)。 7.2.2 在营养钵中种植抗虫转基因植物材料及其对应的非转基因植物材料，土壤采用适宜植物生长的基 质。出苗后，每盆保留1株植物材料。 7.2.3 待受试植物长出2片～4片叶后，定株编号。在受试植物茎基部缠绕脱脂棉条，并保持脱脂棉条 湿润。 7.2.4 每株植物材料接幼螨不少于20头，记录幼螨数量作为接螨基数；阳性对照组接螨后喷施杀螨剂； 以每株上喷施均匀完全、叶面上药液不下滴为准，待植株上液滴自然晾干后，置于7.2.1条件下饲养。 7.2.5 为防止接至植株上的二斑叶螨逃逸，试验期间始终保持茎基部缠绕脱脂棉条湿润，并避免不同植 株间的叶片相互接触。 7.2.67d 后，观察记录各处理每株植物材料上二斑叶螨的存活数量(用小毛笔轻触螨虫附肢，无任何反 应则视为死亡),计算死亡率。 8 结果分析与表述 8.1 对照处理结果分析 如果阴性对照组的二斑叶螨平均死亡率低于20%,阳性对照组的二斑叶螨平均死亡率显著高于阴性 对照组的二斑叶螨平均死亡率，表明试验体系工作正常；否则，需要查找原因，重新进行试验。 8.2 数据处理 根据试验记录计算二斑叶螨死亡率。 死亡率按公式(1)计算。 式中： ………………………………………… (1) X