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生化制药精选 第一页，共二十七页，2022年，8月28日 基因组文库的构建步骤 1、从组织或细胞提取基因组DNA； 2、用限制性酶部分水解成适当长度的DNA片段，经分级分离选出一定大小合适克隆的DNA片段； 3、通常采用λ噬菌体或柯斯质粒载体等容载量较大的克隆载体，在适当位点将载体切开； 4、将基因组DNA片段与载体进行体外连接； 5、重组体DNA直接转化细菌或用体外包装的重组λ噬菌体颗粒感染敏感细菌细胞。最后得到携带重组DNA的细菌群体或噬菌体群体即构成基因文库。 第二页，共二十七页，2022年，8月28日 cDNA文库的构建步骤 ① 从生物体或细胞中提取mRNA ； ② 利用逆转录酶以寡聚核苷酸为引物合成cDNA的一条链； ③ 利用DNA聚合酶I，以cDNA第一条链作为模板，用适当引物合成cDNA第二条链； ④ cDNA与载体的体外连接； ⑤ 噬菌体的体外包装及感染或质粒的转化。 第三页，共二十七页，2022年，8月28日 动物细胞培养基种类和组成 动物血清的作用 提供有利于细胞生长增殖所需的各种生长因子和激素； 提供有利于细胞贴壁所需的贴壁因子和生长因子； 提供可识别金属、激素、维生素和脂质的结合蛋白； 提供细胞生长所必需的脂肪酸和微量元素； 提供良好的pH缓冲系统。 第四页，共二十七页，2022年，8月28日 葡萄糖氧化酶催化葡萄糖与氧反应生成葡