农业农村部公告第323号-2-2020CN.docx

ICS 65.020.01 B 04 中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 农业农村部公告第323号一2—2020 代替农业部869号公告—5—2007 转基因植物及其产品成分检测 耐除草剂油菜MS8×RF3 及其衍生品种 定性PCR 方法 Detection of genetically modified plants and derived products— Qualitative PCR method for herbicide-tolerant rapeseed MS8xRF3 and its derivates 2020-08-04 发布 2020-11-01实施 中华人民共和国农业农村部发布 I 农业农村部公告第323号—2—2020 前 言 本标准按照 GB/T1.1—2009 给出的规则起草。 本标准代替农业部869 号公告 — 5 2007《转基因植物及其产品成分检测 抗除草剂转基因油菜 MS8、RF3 及其衍生品种定性 PCR 方法》。与农业部869号公告—5—2007相比，除编辑性修改外主要变 化如下： ——修改了标准名称； 修改了原理中关于预期扩增产物的表述(见第4章，2007年版的第4章) 修改了普通PCR 方法的引物序列，增加了实时荧光PCR 方法的探针序列，删除了 PTA29 启动 子的检测引物序列(见5.13、5.14,2007年版的5.12); 修改了普通PCR 检测反应体系和反应程序，增加了实时荧光 PCR 检测反应体系和程序(见 7.5,2007年版的7.5); 修改了PCR 检测实验操作的技术细节(见第7章，2007年版的第7章); 修改了样品检测结果分析和表述(见第8章，2007年版的第8章); 增加了检出限(见第9章); 增加了资料性附录(见附录A)。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由中华人民共和国农业农村部提出。 本标准由全国农业转基因生物安全管理标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：农业农村部科技发展中心、中国农业科学院油料作物研究所、农业农村部环境保护 科研监测所。 本标准主要起草人：武玉花、宋贵文、吴刚、梁晋刚、李俊、章秋艳、李晓飞、李允静。 农业农村部公告第323号— 2-2020 转基因植物及其产品成分检测 耐除草剂油菜 MS8×RF3 及其衍生品种定性 PCR 方法 1 范围 本标准规定了转基因耐除草剂油菜 MS8×RF3 转化体特异性普通 PCR 和实时荧光 PCR 两种检测 方法。 本标准适用于转基因耐除草剂油菜 MS8×RF3 及其衍生品种，以及制品中MS8×RF3 转化体成分的 定性 PCR 检测 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 农业部1485号公告—4—2010 转基因植物及其产品成分检测 DNA 提取和纯化 农业部2031号公告—9—2013 转基因植物及其产品成分检测 油菜内标准基因定性 PCR 方法 农业部2031号公告— 19—2013 转基因植物及其产品成分检测 抽样 NY/T 672 转基因植物及其产品检测 通用要求 3 术语和定义 农业部2031号公告 — 9 2013界定的以及下列术语和定义适用于本文件。 3.1 MS8 转化体特异性序列 event-specific sequence of MS8 MS8 的外源插入片段5端与油菜基因组的连接区序列，包括油菜基因组序列及转化载体 T-DNA 部 分序列。 3.2 RF3 转化体特异性序列 event-specific sequence of RF3 RF3 的外源插入片段5端与油菜基因组的连接区序列，包括油菜基因组序列及转化载体 T-DNA 部 分序列。 4 原理 根据耐除草剂油菜MS8、RF3 转化体特异性序列设计特异性引物及探针，对试样进行 PCR 扩增。依 据是否扩增获得预期的DNA 片段或典型扩增曲线，判断样品中是否含有耐除草剂油菜 MS8、RF3 转化体 成分。 5 试剂和材料 除非另有说明，仅使用分析纯试剂和重蒸馏水。 5.1 琼脂糖。 5.2 10 g/L溴化乙锭(EB) 溶液：称取1.0g 溴化乙锭，溶解于100mL 水中，避光保存。 警告——溴化乙锭有致癌作用，配制和使用时应戴一次性手套操作并妥善处理废弃物。 注：根据需要可选择其他效果相当的核酸染料代替溴化乙锭作为核酸电泳的染色剂。 5.3 10mol/L 氢氧化钠(NaOH) 溶液：在160 mL 水中加入80.0