农业农村部公告第323号-8-2020CN.docx

ICS 65.020.01 B 04 中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 农业农村部公告第323号一8—2020 转基因植物及其产品成分检测 质粒DNA 标准物质制备技术规范 Detection of genetically modified plants and derived products— Technical specification for manufacture of plasmid DNA reference material 2020-08-04 发布 2020-11-01实施 中华人民共和国农业农村部发布 I 农业农村部公告第323号—8—2020 前 言 本标准按照GB/T1.1—2009 给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由中华人民共和国农业农村部提出。 本标准由全国农业转基因生物安全管理标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：农业农村部科技发展中心、上海交通大学。 本标准主要起草人：杨立桃、沈平、张大兵、宋贵文、杨卉、郭金超。 农业农村部公告第323号—8—2020 转基因植物及其产品成分检测 质粒 DNA 标准物质制备技术规范 1 范围 本标准规定了转基因植物质粒 DNA 标准物质制备的基本技术要求、流程和关键参数。 本标准适用于转基因植物及其产品成分检测、检测方法评价用的质粒 DNA 标准物质的制备。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 JJF 1186 标准物质认定证书和标签内容编写规则 JJF 1342 标准物质研制(生产)机构通用要求 JJF 1343 标准物质定值的通用原则及统计学原理 农业部2630号公告 13—2017 转基因植物及其产品成分检测 质粒 DNA 标准物质定值技术规范 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 标准物质 reference material,RM 具有足够均匀和稳定的特定特性的物质，其特性适用于测量或标称特性检查中的预期用途。 注1:标称特性的检查提供标称特性值及其不确定度。该不确定度不是测量不确定度。 注2:赋予或未赋予量值的标准物质都可用于测量精密度控制。只有赋予量值的标准物质才可用于校准或测量正确度 控制。 注3:“标准物质”既包括具有量的物质，也包括具有标称特性的物质。 3.2 (转基因植物)质粒 DNA 标准物质 plasmid DNA reference material(of genetically modified plant) 含有特定的转基因植物外源基因片段和/或物种内标准基因片段的重组质粒 DNA 制备形成的标准 物质。 3.3 (转基因植物)质粒DNA 标准物质的特性值 property value of a plasmid DNA reference material (of genetically modified plant) 与预期转基因植物及其产品检测用途相关的值，包括质粒 DNA 拷贝数浓度值和/或外源基因片段与 内标准基因片段个数的比值。 4 要求 4.1 质粒 DNA 标准物质制备实验室应符合以下要求： a) 质粒 DNA 标准物质制备实验室必须进行明确分区，分别用于质粒构建、菌种扩繁、质粒 DNA 提 取与纯化、质粒 DNA 标准物质分装和保存。 b) 质粒 DNA 标准物质生产实验室环境应符合JJF 1342 规定的要求。 c) 质粒DNA 标准物质分析实验室应符 合GB/T 27403 规定的要求 4.2 质粒 DNA 标准物质制备人员应符合以下要求： a) 应具备转基因生物及其产品检测和标准物质研制等相关业务知识； 2 农业农村部公告第323号—8—2020 b) 应在开展质粒 DNA 标准物质制备工作前，接受分子克隆等相关专业技术和业务知识培训。 5 质粒 DNA 标准物质制备流程图 质粒 DNA 标准物质制备主要包括重组质粒构建与验证、候选物繁殖、质粒 DNA 标准物质制备分装、 均匀性检验、稳定性考察、定值及不确定度评定、包装与储存等，流程见图1。 重组质粒构建与验证 候选物繁殖 质粒DNA 标准物质制备分装 均匀性检验 稳定性考察 定值及不确定度评定 包装与储存 图 1 质粒 DNA 标准物质制备流程 6 重组质粒构建 6.1 首先获得转基因植物外源基因序列和目标物种内标准基因序列。 6.2 根据外源基因序列和目标物种内标准基因序列设计带有酶切位点的引物，利用 PCR 扩增，体外克隆