遗传病的分析 扩增产物的鉴定.pptVIP

遗传病的分析 扩增产物的鉴定 第一页，共十五页，2022年，8月28日 限制性内切酶酶切技术 琼脂糖凝胶电泳技术 第二页，共十五页，2022年，8月28日 一、限制性内切酶酶切技术 第三页，共十五页，2022年，8月28日 原 理 限制性内切酶大多由大肠杆菌中提取纯化得到，能特异性识别和切割双链DNA分子中的特异序列（一般识别4－6个核苷酸序列） 由于大多数内切酶具绝对的位点特异性，因此可以选择合适的内切酶切割扩增产物，通过片段大小鉴定基因是否有缺失或缺陷。 第四页，共十五页，2022年，8月28日 原 理 本实验使用限制性内切酶（Lwe I） ，酶切位点： 5′….GCATC(N)5↓…3′ 3′….CGTAG(N)9↑….5′ 正常人样品具有酶切位点，能够被酶切开，分成2个片断；而病人组G则被A替代，酶切位点丧失，不能被酶所切动，所以还是１个片断。 第五页，共十五页，2022年，8月28日 器材与试剂 高速离心机、恒温水浴箱、移液枪、枪头、塑料离心管等 Lwe I限制性内切酶、三蒸水、缓冲液等 第六页，共十五页，2022年，8月28日 操 作 1、取样品2份（病人、正常人PCR扩增产物） 无菌ddH2O 14ul 缓冲液10× 2ul