DB64 1081_2015  葡萄脱毒组培苗繁育技术规程.docx

ICS 点击此处添加中国标准文献分类号 DB64 宁 夏 回 族 自 治 区 地 方 标 准 DB 64/ T 1081-2015 葡萄脱毒组培苗繁育技术规程 点击此处添加标准英文译名 点击此处添加与国际标准一致性程度的标识 (送审稿) 2015-09-02发布 2015-09-02实施 2015-09-02发布 宁夏回族自治区质量技术监督局 发布 I DB64/ T—XXXX 前 言 本标准的编写格式符合GB/T1.1-2009 《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写》的要求。 本标准由宁夏回族自治区林业厅提出并归口。 本标准主要起草单位：宁夏林业研究所股份有限公司、宁夏森淼种业生物工程有限公司、种苗生物 工程国家重点实验室、国家经济林木种苗快繁工程技术研究中心、宁夏农垦西夏王实业有限公司葡萄苗 木分公司。 本标准主要起草人：徐美隆、沈效东、李永华、陈春伶、何金柱、谢军、刘玉娟、王巧珍、乔改霞、 郭晓婧。 1 DB64/ T—XXXX 葡萄脱毒组培苗繁育技术规程 1 范围 本标准规定了葡萄脱毒组培苗的术语与定义、葡萄脱毒技术流程、葡萄脱毒组培苗繁育技术、葡萄 脱毒组培苗商品分级标准、葡萄脱毒组培苗分级检测方法。 本标准适用于葡萄苗脱毒、葡萄脱毒组培试管苗、穴盘苗、营养袋苗的生产管理及葡萄脱毒组培苗 商品质量分级。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改版本)适用于本文件。 DB64/T 829-2013 葡萄苗木病毒检测技术规程 NY 469-2001 葡萄苗木 3 术语与定义 下列术语和定义适用于本标准。 3.1 植物组织培养 指利用植物的器官、组织等作为外植体，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养，以形成再生 植株的技术与方法。 3.2 葡萄微茎尖培养脱毒技术 根据病毒在植物体内通过维管系统而移动，但在分生组织中不存在维管系统的原理，以不带有病毒 的葡萄顶端分生组织为外植体，通过植物组织培养技术，将其培养成完整植株的技术和方法，该再生植 株通过检测不带有规定病毒。 3.3 葡萄脱毒组培苗 以经过脱毒处理且检测不带有规定病毒的试管苗为母本，通过植物组织培养技术进行快速繁育而成 的葡萄种苗。葡萄脱毒组培苗培育分为四个阶段：葡萄脱毒组培试管苗、葡萄脱毒组培穴盘苗、葡萄脱 毒组培营养袋苗、 一年生葡萄脱毒组培自根苗。 2 DB64/ T—XXXX 3.4 葡萄脱毒组培试管苗 是指在试管内培育阶段的葡萄脱毒组培苗。 3.5 葡萄脱毒组培穴盘苗 是指在规定规格穴盘内培育阶段的葡萄脱毒组培苗。 3.6 葡萄脱毒组培营养袋苗 是指在规定规格营养袋内培育阶段的葡萄脱毒组培苗。 3.7 一年生葡萄脱毒组培自根苗 是指葡萄脱毒组培营养袋苗在大田培育一年后的自根苗。 4 葡萄脱毒技术流程 4.1 葡萄组培苗培育 4.1.1 培养基配制灭菌 将制备好的各种培养基分装于规格为6cm～8cm×12cm的玻璃培养瓶，每瓶30 mL～40mL, 用封口膜 扎紧，在压力为0.11MPa 的高压灭菌锅中灭菌20min, 冷却后备用。 4.1.2 外植体采集 选择3年～5年树龄、品种纯正的葡萄健壮植株为采样母株，采集带有腋芽的半木质化茎段作为外植 体，采样最佳时期为5月中旬～6月上旬，采集最佳时间为早上10点以前。 4.1.3 外植体消毒及启动培养 将采集的外植体在室内用自来水冲洗2h～3h,每个茎段修剪成带有2个～3个腋芽，然后置于超净工 作台上，75%乙醇消毒20s～30s,用无菌水清洗3次～5次，0. 1%升汞消毒4min～6min, 再用无菌水 清洗3次～5次，将茎段两端褐化部分修剪掉后接种于启动培养基(配方见附录A)。 暗培养3d后，置 于光照强度2000 Lx～3000Lx, 光照时间16h ·d1的环境下进行培养，整个环节培养温度控制在25℃~28℃ 之间，培养时间30d～40d。 4.1.4 增殖生根培养 外植体在启动培养基上培养30d～40d后，将2cm 以上带有2个新生芽的茎段剪下接种于增殖生根培 养基(配方见附录A), 置于光照强度2000Lx～3000Lx, 光照时间16h ·d1的环境下进行培养，整个环节 培养温度控制在25℃~28℃之间， 每隔28d～30d继代一次。 4.2 葡萄组培苗脱毒 4.2.1 变温处理 3 DB64/ T—XXXX 将生根后的葡萄组培试管苗置于人工气候培养箱中进行变温处理，处理条件为：在37℃条件下培养 16h ·