NY_T 3879-2021CN 饲料中25-羟基维生素D3的测定.docx

ICS CCS 65.120 B 46 NY 中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准 NY/T 3879—2021 饲料中25-羟基维生素D? 的测定 Determination of 25-Hydroxy Vitamin D? in feeds 2021-05-07 发布 2021-11-01实施 中华人民共和国农业农村部发布 I NY/T 3879—2021 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由农业农村部畜牧兽医局提出。 本文件由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC 76)归口。 本文件起草单位：上海市兽药饲料检测所、帝斯曼维生素(上海)有限公司。 本文件主要起草人：黄士新、商军、曹莹、张浩然、王博、严凤、华贤辉、张亦菲、田恺、黄家莺、吴剑平、徐 汀、张婧、贡松松、张进、王晓燕、虞哲高、肖平、石宝石。 NY/T 3879—2021 饲料中25-羟基维生素 D? 的测定 1 范围 本文件规定了饲料中25-羟基维生素 D;测定的高效液相色谱法和液相色谱-串联质谱法。 本文件中高效液相色谱法适用于含量大于2mg/kg 的添加剂预混合饲料中25-羟基维生素 D.含量的 测定；液相色谱-串联质谱法适用于配合伺料、浓缩饲料和含量小于等于2 mg/kg 的添加剂预混合饲料中 25-羟基维生素Ds含量的测定。 本文件高效液相色谱法中添加剂预混合饲料的检出限为0.2 mg/kg, 定量限为1.0 mg/kg。 液相色 谱-串联质谱法中配合饲料的检出限为2μg/kg,定量限为5μg/kg;浓缩饲料的检出限为5 pg/kg, 定量限 为10μg/kg;添加剂预混合饲料的检出限为50μg/kg,定量限为100μg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 20195 动物饲料 试样的制备 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 高效液相色谱法 4.1 原理 试样依次加水和甲醇，超声提取25 ·羟基维生素D?, 用高效液相色谱仪测定，外标法定量。 4.2 试剂或材料 4.2.1 水：GB/T 6682,一级。 4.2.2 甲醇：色谱纯。 4.2.385%甲醇溶液：取85mL, 甲醇(4.2.2).加水稀释至100mL, 混匀。 4.2.4标准储备溶液(1mg/mL): 称取25-羟基维生素D, 标准品(C?HaO? ·H?O,CAS 号：63283-36-3. 纯度不低于98%)25 mg, 准确至0.01 mg, 置于25 mL 棕色容量瓶中，用甲醇(4.2.2)溶解定容。于 -20℃下保存，有效期为2个月。 4.2.5标准中间溶液1(100μg/mL): 准确移取25-羟基维生素D; 标准储备溶液(4.2.4)2.00 mL 于 20mL 棕色容量瓶中，用甲醇(4.2.2)定容。于4℃冷藏保存，有效期为2周。 4.2.6 标准中间溶液Ⅱ(25μg/mL): 准确移取标准中间溶液1(4.2.5)5.00mL 于 2 0mL 棕色容量瓶 中，用甲醇(4.2.2)定容。临用现配。 4.2.7标准系列溶液：分别准确移取标准中间溶液Ⅱ(4.2.6)适量于棕色容量瓶中，用85%甲醇溶 液(4.2.3)稀释定容配成标准系列溶液，浓度分别为0.05 μg/mL、0.5μg/mL、1μg/mL、5μg/mL、 10μg/mL、25μg/mL。 临用现配。 4.2.8微孔滤膜：0.22μm, 有机系。 4.3仪器设备 4.3.1 高效液相色谱仪：配有紫外检测器/二极管阵列检测器。 2 NY/T 3879—2021 4.3.2 分析天平：感量0.1 mg 和0.01 mg。 4.3.3 离心机：转速不低于9000 r/min。 4.3.4 超声波仪：功率不低于280 W。 4.4 样品 按 GB/T 20195的规定制备试样，至少200g,粉碎使其全部通过0.42 mm 孔径的分析筛，充分混匀， 装入磨口瓶中，避光保存，备用。 4.5 试验步骤 4.5.1 试样溶液的制备 平行做2份试验。称取试样3g,准确至0.0001g,置于50 mL 离心管中，加水10 mL, 超声10 min, 期间旋摇1次以防样品附着管底，加入甲醇(4.2.2)30mL, 摇匀，超声提取2