DB64 711_2011  马铃薯脱毒种薯（苗）病毒分子检测 技术规程.docx

ICS 65.020.01 B16 DB64 宁 夏 回 族 自 治 区 地 方 标 准 DB 64/ T711—2011 马铃薯脱毒种薯(苗)病毒分子检测技术规程 2011- 11-28发布 2 0 1 1 - 1 1 - 2 8 实 施 宁夏回族自治区质量技术监督局 发布 DB64/ T711—2011 前 言 本标准的编写格式符合GB/T1.1-2009 《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写》的要求。 本标准由宁夏农林科学院提出。 本标准由宁夏回族自治区农牧厅归口。 本标准主要起草单位：宁夏农业生物技术重点实验室、宁夏农林科学院植物保护研究所。 本标准主要起草人：宋玉霞、陈晓军、王敬东、陈虞超、张丽、石磊、赵东、李苗、沈瑞清、郭成 谨、朱玉斌、马洪爱、甘晓燕。 工 1 DB64/ T711—2011 马铃薯脱毒种薯(苗)病毒分子检测技术规程 1 范围 本标准规定了马铃薯脱毒种薯(苗)病毒分子检测技术规程的术语和定义、检测对象、抽样规则、 检测方法、脱毒植株判定规则和质量标准。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB 18133 马铃薯脱毒种薯 NY/T 401-2000 脱毒马铃薯种薯(苗)病毒检测技术规程 3 术语和定义 GB18133界定的以及下列术语和定义适用于本标准。 3.1 马铃薯脱毒原原种 将马铃薯脱毒苗移栽于无马铃薯病源、虫源的隔离区条件下生产的符合质量标准的种薯。 3.2 马铃薯脱毒原种 由马铃薯脱毒原原种作种薯，在无马铃薯病源、虫源的隔离区条件下生产出的符合质量标准的种薯。 3.3 马铃薯脱毒一级种 由马铃薯脱毒原种作种薯，在无马铃薯病源、虫源的隔离区条件下生产出的符合质量标准的种薯。 3.4 RT-PCR 反转录聚合酶链式反应，即在逆转录酶作用下，以RNA为模板反转录出与其互补的cDNA链，随后在 DNA聚合酶作用下，以cDNA为模板合成出另一条与其互补的DNA链，最后通过PCR进行DNA扩增的过程。 2 DB64/ T711—2011 3.5 内标引物 在RT-PCR反应中，以马铃薯肌动蛋白基因为内对照而设计的扩增引物。 3.6 特异性条带 在RT-PCR反应中，以各病毒特有序列设计引物扩增得到的片段大小特定的条带。 3.7 感病植株允许率 马铃薯脱毒种薯(苗)中感染病毒植株数的允许比率。 4 检测对象 病毒检测应符合表1的规定。 表1 检测病毒的特性 病毒名称 病毒类型 症 状 危 害 马铃薯纺锤形 块茎类病毒 (PSTVd) 无蛋白外壳 的裸露RNA类 病毒 感病植株表现矮化，束顶，叶失绿，叶背面紫红 色，叶片变小，叶柄与主茎的角度变小。感病块 茎的皮色也会发生褪色现象。 危害分布十分广泛，造成块茎变细 长，形如纺锤，严重影响马铃薯的 产量和品质，造成减产20%～60%。 马铃薯X病毒 (PVX) 单链RNA病毒 最常见的症状是轻型斑驳花叶，表现为叶片颜色 深浅不一，但叶片平展不变小，不变形，不坏死。 造成10%的减产。 马铃薯Y病毒 (PVY) 单链RNA病毒 初期症状表现为植株花叶、叶片坏死；继发症状 为植株矮化、皱缩、斑驳和卷曲等。 造成30%～50%的减产。 马铃薯S病毒 (PVS) RNA病毒 感病植株表现为叶脉下凹，叶片粗缩，微向下弯 曲，叶色变浅，轻度垂叶，植株呈开散状。 病株常产生小块茎，造成减产 10%～20%。 马铃薯卷叶病 毒(PLRV) 正链RNA病毒 病株由下部至上部沿叶片中脉卷曲，呈匙状，叶 肉变脆呈革质化，叶背有时出现紫红色，上部叶 片褪绿，重者全株叶片卷曲，整个植株直立矮化， 块茎变瘦小，薯肉呈现锈色网纹斑。 易感品种造成90%减产， 一般品种 造成40%～70%减产。 5 抽样规则 原原种在瓶苗期进行第1次检测，在生育期进行第2、3次检测，第2次检测在植株现蕾期，第3次检 测在植株盛花期。原种和一级种薯在生育期进行2次检测，第1次检测在植株现蕾期，第2次检测在植株 盛花期。检测过程中的抽样规则按NY/T401-2000的规定执行。 3 DB64/ T711—2011 6 检测方法 采用分子生物学RT-PCR (反转录聚合酶链式反应)扩增法对各类病毒进行检测。