【DNA重组】分子生物学-10-3-RNA操作.pptxVIP

;5.3.1 RNA提取概述;;RNA分析;RNA是一类极易降解的分子;;;防止RNA酶的污染 ;;;;;RNA酶抑制剂 ;;;;RNA制备方法;操作;经典方法：苯酚+胍盐法;;;Trizol法—傻瓜法;Trizol +异丙醇;Trizol + 吸附柱;;试剂盒 聪明的傻瓜法;;3. 实验材料与试剂;4. 实验方法和步骤;实验步骤 （每一步均要求无RNase污染） ① 称取新鲜材料100 mg，液氮速冻； ② 在预冷的研钵中并在液氮中将材料研磨成细粉末，转移到2ml或1.5ml离心管中； ③ 待液氮挥发（但不能解冻）后，加入450 μl提取缓冲液RLT，混匀后在56℃下温育1～3min；;④ 将裂解液加到离心柱（淡紫色）上下接一个2ml收集管，最大转速离心 2min。裂解液通过柱子时被均质化，小心吸取上清液，转移到另一新离心管； 加入0.5倍体积（225 μl）96～100% 乙醇，混合均匀。加入乙醇后，可能会出现沉淀，无影响； ;将混合液全部（包括沉淀675 μl）转移到吸附离心柱（粉红色）内，下接2 ml的收集管，10000 rpm离心15秒。弃去管内液体； ⑦加入700μl RW1缓冲液，10000rpm转速下离心25秒，弃去收集管； ⑧将离心柱转移到一个新的2ml收集管上，加入500μl RPE缓冲液，10000 rpm离心15秒，弃去管内液体重复使用收集管；;加入5