生物化学生物化学蛋白质.pptxVIP

生物化学生物化学蛋白质;一、一级结构与功能的关系;;1、同功能蛋白质一级结构的种属差异与分子进化;;;; 生物 与人不同的AA数目 黑猩猩 0 恒河猴 1 兔 9 袋鼠 10 牛、猪、羊、 10 狗、驴 11 马 12 鸡、火鸡 13 ;根据细胞色素 C的顺序种属差异建立起来的进化树;2、一级结构的变异与分子病; ;正常红细胞与镰刀形红细胞的扫描电镜图;2、空间结构与功能的关系;一级结构是空间构象的基础 ; 天然状态，有催化活性;肌红蛋白与血红蛋白的结构与功能 ;;;第19页/共78页;;血红蛋白与氧结合的协同性;血红蛋白氧饱和度;肌红蛋白氧饱和度;;;Hb的输氧功能;血红蛋白与氧结合的分子机制; ;第六节　蛋白质的性质; 蛋白质两性解离性质和等电点;;蛋白质电泳;不同种类的蛋白质由于等电点的不同，在一个指定pH条件下所带电荷的性质和多少也不相同，加上它们分子量大小、颗粒形状的不同，因此在电场中移动的方向和速度各不相同。根据这一原理可用此方法对蛋白质进行分离和分析。 ;1）圆盘电泳：玻璃管中进行的凝胶电泳。 2）平板电泳：铺有凝胶的平板上进行的电泳。 ; 聚丙烯酰胺凝胶电泳 既可以作为蛋白质纯度检验方法，也可以纯化、制备蛋白质。;PAGE垂直平板电泳示意图;第37页/共78页;第38页/共78页;蛋白质胶体性质;;蛋白质胶体性质的应用;透析与超过滤简易装置;蛋白质的分子量及其测定;1、沉降速度法;超离心法最为准确，但需昂贵的超速离心机。 用光学方法测定界面移动的速度即为蛋白质的离心沉降速度。 蛋白质的沉降速度与分子大小和形状有关，因为沉降系数S大体上和分子量成正比关系，故可应用超速离心法测定蛋白质分子量，但对分子形状高度不对称的大多数纤维状蛋白质不适用。;离心机结构示意图;沉降系数(sedimentation coefficient, S); ;;由沉降系数S可根据斯维得贝格〔Svedberg〕方程计算蛋白质分子的相对分子质量： M=RST/D〔1－iρ〕 R：气体常数 T：绝对温度 D：扩散系数 i:蛋白质的偏微比容 ρ：溶剂的密度 ;2、凝胶过滤（又称分子筛层析）;交联葡聚糖（Sephadex）;凝胶过滤法;①当kd=0时，Ve=Vo，溶质全从Vo出来， 无分配。 ②当kd=1时，Ve=Vo+Vi，溶质全进筛子，各物质尽管有分配，但各物质不能分开。 ③当0〈kd〈1时，Ve=Vo+kd·Vi,各溶质具不同分配，得以分离。;第55页/共78页;3、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳;;第58页/共78页;第59页/共78页;蛋白质的沉淀;;2. 盐溶和盐析 盐溶：低浓度的中性盐在蛋白质分子表面形成双电层， 使蛋白质溶解度增加； 盐析：高浓度的中性盐破坏蛋白质分子表面的水化层， 使蛋白质溶解度降低，发生沉淀析出。 分段盐析：不同蛋白质盐析所需的盐浓度不同，蛋白质溶液中，逐渐增大盐浓度，不同蛋白质先后析出，称分段盐析。 ;3.有机溶剂沉淀法 a 有机溶剂（与水相溶）争取蛋白质颗粒上的水 膜，使之沉淀。 b 有机溶剂：乙醇、丙酮 c 低温操作，边加入边搅拌，防止局部过热，引 起变性，尽量缩短处理时间。 ; 蛋白质变性与复性;;蛋白质复性;蛋白质的紫外吸收光谱;蛋白质主要呈色反应;双缩脲反应;第七节 蛋白质的分类;简单蛋白质分类;结合蛋白质分类;一、蛋白质的分离纯化; 1、从组织细胞中溶解放出蛋白质，并保持天然状态，常用低温冰冻、化学试剂及溶菌酶破壁、破膜，再用溶剂提取。 2、分离所需要蛋白质与其他蛋白质 a 等电点沉淀 b 盐析和有机溶剂分级分离 纯化：a 离子交换层析