质粒复制的调控机制.pptVIP

质粒复制的调控机制 第一页，共十九页，2022年，8月28日 主要内容 质粒的自主??复制性 质粒复制的调控机制 质粒不相容性(inc, incompatibility) 第二页，共十九页，2022年，8月28日 质粒(plasmid) 质粒是能独立于寄主染色体而自主复制并被稳定遗传的一类核酸分子 绝大多数的质粒是DNA型 目前已知只有酵母杀伤质粒(killer plasmid)是RNA型 绝大多数的天然DNA质粒为共价、闭合、环状的分子结构，即cccDNA (covalently close circular DNA ) 质粒DNA的分子量范围：1 - 200 kb 第三页，共十九页，2022年，8月28日 一 质粒的自主复制性 质粒能利用寄主细胞的DNA复制系统进行自主复制,并赋 予宿主细胞特定的遗传性状. 质粒DNA的复制方式: 主要有“θ”型复制和滚环复制 根据在每个细胞中拷贝数的多寡，质粒可分为两大复制类型： ① 严紧型质粒(Stringent plasmid) ② 松弛型质粒(Relaxed plasmid) 一种质粒究竟是属于严紧型还是松弛型并不是绝对的，同一质粒在不同的宿主细胞中可能具有不同的复制型，这说明质粒的复制不仅受自身的制约，同时还受到宿主的控制，同宿主的状况有关。 第四页，共十九页，2022年，8月28日 质粒复制类型 严紧型质粒 (Stringent plasmid) 松弛型质粒 (Relaxed plasmid) 拷贝数 少 (1 ～ 3 个拷贝数) 多 (10 ～ 60 个拷贝数) 分子量 较大 较小 复制方式 随细菌染色体的复制同步进行，即只在细胞周期的一定阶段进行复制，当细胞染色体复制一次时质粒也只复制一次 独立于细菌染色体而自主复制,即在整个细胞周期中随时可以复制，当染色体复制已经停止时，该质粒仍然能够继续复制。 控制系统 单拷贝控制系统 多拷贝控制系统 常见质粒 F质粒, P1质粒 Col E1质粒(20～30) ; pBR322 (16 copies); pUC (30～50 copies)  第五页，共十九页，2022年，8月28日 二 质粒复制的调控机制 为与宿主稳定地共存并把代谢负担减至最低, 质粒必须控制自身的复制。在一定的生长条件下、在一定的宿主菌中, 某一质粒的拷贝数(N) 通常是一定的。 负调控模型 质粒刚移入新宿主时,负调节因子的浓度可忽略不计, 质粒能在短时间内达到正常拷贝数, 然后通过增加或减少每细胞周期每质粒拷贝的复制率来调节细胞中的质粒拷贝数(N), 使该菌群中各细胞的质粒拷贝数维持在平均值(Nav )附近的一个很小的波动范围内。 上述控制机制是由质粒自编码的负控制系统通过调控复制起始率而实现的, 其负控制元件就编码在质粒上。 第六页，共十九页，2022年，8月28日 现在已知的复制控制方式主要有三类: ⑴ 单一元件控制; ⑵ 主、辅元件控制; ⑶ 2 种控制元件协同作用。 依所用负控制元件的类型不同, 质粒复制的控制系统主要有: ⑴ 重复子结合调控 (iteron-binding regulation) ⑵ 抑制物-靶位调控 (ihibitor-target regulation) ① 反义RNA单独控制 ② 反义RNA 与转录阻遏蛋白共同控制 第七页，共十九页，2022年，8月28日 ⒈ 重复子结合调控 (iteron-binding regulation) 在含重复子的质粒复制起点(ori) 中, 有一富AT 区和多个重复序列(重复子) , 质粒编码的复制起始蛋白Rep 能以有序的方式与重复子序列结合, 起到控制质粒拷贝数的作用。 在上述模式中,Rep蛋白结合在复制起始区及其附近的重复序列上,对复制起始起着正调节作用,同时对其自身的表达起负调节作用。 第八页，共十九页，2022年，8月28日 Regulation of plasmid copy number by iterons: Rep 蛋白能以二体形式结合于启动子区, 反式作用, 对其合成进行自我调节; Rep 蛋白对复制具有双向调控作用, 且视它的胞内浓度而定, 当胞内浓度低时起复制激活剂作用, 胞内浓度高时则起抑制剂作用。 “手铐”模型( “handcuf