人全血DNA的提取实验步骤.docVIP

人全血DNA的提取实验步骤 取2ml抗凝血于无菌15ml离心管 ↓3000r/min 离心5min 弃上清，加入适量生理盐水 ↓上下颠倒混匀 3000r/min 离心5min ↓ 弃上清，加入约5倍体积的无菌ddH2O ↓上下颠倒混匀 室温静置5分钟，4000r/min 离心10min ↓ 弃上清，加入约5倍体积的无菌ddH2O重悬白细胞沉淀 ↓上下颠倒混匀 4000r/min 离心10min ↓ 弃上清，加入STE至2毫升 ↓上下颠倒混匀 再加10%SDS 200μl和10mg/ml 蛋白酶K 20μl 混匀 ↓置56℃水浴震荡3h 取出观察白细胞消化情况（无可见沉淀），冷却至室温 ↓ 加入等体积饱和酚，缓慢摇动20min ↓4000r/min 离心10min 小心吸出上清转于另一无菌15ml离心管中 ↓ 加入等体积氯仿：异戊醇（24：1）缓慢摇动20min ↓4000r/min 离心10min 小心吸出上清转于另一无菌15ml离心管中 ↓ 向上清中加入1/10体积的3M NaAC（pH5.2），混匀 ↓ 再加入2倍体积的无水乙醇，缓慢摇动即可见DNA丝状体 ↓ 用无菌吸管吸出DNA丝状体移至装有1ml70%乙醇的Epp管内 ↓ 12000r/min 离心3~5min，弃上清。沉