细菌实验诊断技术.pptxVIP

细菌实验诊断技术; 细菌感染的检验：是指样品的采集送检、处理，运用表型和遗传学方法检查病原体的特征作出结果报告的全过程。;2. 根据诊断目的决定鉴定的水平 （1）病原学诊断→鉴定到细菌的种； （2）指导临床治疗→进行直接或间接药物敏感实验 （3）流行病学监控和调查→鉴定到型 （4）病原学研究、疗效监控→分子水平的检测; 1）尽早采集 一旦怀疑细菌感染，应及时采集标本进行细菌学检验，尽早获得病原学诊断和抗生素敏感资料，对细菌感染的治疗具有极其重要意义； 2）标本采集尽量在用药前进行； 3）根据可疑病原菌和实验方法的不同选择合适的采集时期； 【 例如】肠伤寒病程第1周采血培养阳性率最高，第2周开始下降；骨髓培养阳性率的趋势和血培养一致但始终高于血培养，且持续至第五周阳性率仍达52%；粪便培养阳性率在第2～4周最高。;4）注意无菌操作，尽量避免杂菌污染； 5）注意采集的方法和部位； 6）标本必须新鲜，及时运送； 7）标本的保存、处理要严格。;1）选择有价值的试验：所选项目大结果可能为阴性/阳性，但阳性/阴性率应大于90%，否则无意义。 2）选择快速简便的项目：鞭毛染色、氧化酶、凝固酶、触酶、O/F等应做为首选项目。 3）一种试验有多种方法时，应了解不同试验的敏感性和特异性。 ;第二节 细菌感染的检验程序和方法;2.染色标本染色 1）单染色法 2）鉴别染色法（复染色法 ）： 革兰染色（Gram stain，GS）; 血液、分泌物、排泄物、穿刺液、脑脊液等标本和液体培养物可直接涂片镜检，有些细菌可做出初步诊断。;三、分离培养 ;2.调整培养基的pH；;（二）接种与分离技术; 2.接种与分离技术;2）斜面的接种：;第15页/共35页;1.温度： ——37℃、22℃、4℃、 42℃;2.气体： 1）普通培养法 2）CO2培养;四、生化试验 ;2.氧化一发酵试验（O/F试验） ;3.甲基红（MR）试验和VP试验;【原理】 氧化酶或称细胞色素氧化酶，是细胞色素呼吸酶系统的终末呼吸酶。作氧化酶试验时，此酶首先使细胞色素C氧化，然后氧化型细胞色素C再使对苯二胺氧化，产生颜色反应。 【方法】取滤纸???角，沾取菌落少许，加试剂一滴，阳性者立即粉红色，并于5-10秒内呈现深紫色。;【原理】过氧化氢酶可使过氧化氢分解为分子态氧。 【方法】 滴加3%过氧化氢溶液数滴于玻片上，挑取固体培养基上的菌落少许于过氧化氢溶液，观察结果。 【 结果】 30s内产生大量气泡者为阳性。;【原理】某些细菌能产生尿素酶分解尿素，产氨使培养基变碱。 【方法】将被检菌接种尿素培养基，35℃培养18～24h观察结果。阴性时应继续观察4d。 【 结果】酚红指示剂变红为阳性，不变为阴性 ;【原理】细菌分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚，吲哚与试剂中的对二甲氨基苯甲醛作用，生成玫瑰吲哚而呈红色。 【方法】挑取纯培养物接种蛋白胨水培养基，于35℃培养1～2d，沿管壁徐徐加入吲哚试剂少许，使成两层，观察结果。 【 结果】两者液面接触处出现红色为阳性，无色为阴性。 ;【原理】当细菌能利用枸橼酸盐作为唯一碳源时，可在枸橼酸盐培养基上生长分解枸橼酸钠，使培养基变碱。 【方法】在枸橼酸盐琼脂斜面上浓密划线，接种被检菌，于35℃培养1～4d，逐日观察结果。 【 结果】枸橼酸盐培养基斜面上有细菌生长，培养基变蓝为阳性；无细菌生长、颜色不变（绿色）为阴性。 ;五、免疫学试验 ;以细菌的菌体成分为待测抗原，用特异性的抗体进行检测，用于细菌的分型或鉴定 常用方法： 1.凝集试验 2.荚膜肿胀试验 3.免疫荧光技术 ;六、药物敏感试验 ;八、微生物商品化及自动化检测和鉴定系统 ;; 第三节??? 实验室质量控制;一、室内质量控制;二、室间质量控制评价 ;THE END;感谢观看！