Lys代谢控制发酵.pptxVIP

Lys代谢控制发酵;Glu产生菌主要生理生化特性 需氧，生物素缺陷型bio-,有乙醛酸循环，羧化酶活性强（bio作为辅酶） 柠檬酸、异柠檬酸、谷氨酸脱氢酶活性高，Glu合成中存在正常反馈阻遏和反馈抑制。菌体细胞膜通透性差，不利于Glu胞外分泌。 ; 生物素对CO2固定反应的影响 生物素是丙酮酸羧化酶的辅酶，参与CO2固定反应，据报道，生物素大过量时（100?g/L以上），CO2固定反应可提高30%。;第五节 Lys代谢控制发酵;Asp 天冬氨酸;Asp三分支途径优先合成Met，后合成Thr、Ile，最后合成Lys Thr和Lys对Asp激酶有协同反馈抑制 Thr对Hse脱氢酶有反馈抑制 Ile对Thr脱氢酶有反馈抑制 Met对O-琥珀酰高丝氨酸合成酶有反馈阻遏 ;3. Lys 代谢控制发酵 菌种的遗传改造 (1)切断支路代谢——Hse营养缺陷型(Hse-)菌株筛选 选育Hse脱氢酶缺失的Hse-菌株，使代谢流向Lys合成，控制Hse添加量，既满足菌??对Met、Thr和Ile生长需要又不形Thr和Lys对Asp激酶的协同反馈抑制，积累Lys (2)用Hse-菌株选育解除Lys反馈抑制突变株; (3) Hse脱氢酶渗漏缺陷型突变株 日本椎尾等人 黄色短杆菌 突变株 ;(4) Lys 生产菌种遗传标记及Lys产量 谷氨酸棒杆菌 Hse－ K.Nakyama 13g/L Hse－AECR 中山清（日本） 42g/L 黄色短杆菌 Hse－AECRCSIFps I.shiio 51g/L (CSI:柠檬酸合成酶抑制；Fps：氟代丙酮酸敏感) 黄色短杆菌 AIII Hse-AECr 徐所维 50-55g/L 钝齿棒杆菌 pI-3-2 Hse-AECr 陈琦 50g/L; (5) 乳糖发酵短杆菌Lys代谢控制发酵 Lys合成与调控机制基本同于谷氨酸棒杆菌、黄色短杆菌。 特殊调控：代谢互锁调控机制 互锁调节：Lys合成受其它氨基酸合成途径产物反馈调节 Lys生产菌种遗传标记和产量： Hse－AECRLeu－ 110g/L （加Hse，限量加Leu，免除Leu对DDP合成酶反馈阻遏互锁调节） Hse－AECRLeu－α-TARAla－ 110g/L （加Hse、Leu，限量加Ala，α-TA是Leu结构类似物） ;3. Lys 代谢控制发酵 菌种的遗传改造 (1)切断支路代谢——Hse营养缺陷型(Hse-)菌株筛选 选育Hse脱氢酶缺失的Hse-菌株，使代谢流向Lys合成，控制Hse添加量，既满足菌体对Met、Thr和Ile生长需要又不形Thr和Lys对Asp激酶的协同反馈抑制，积累Lys (2)用Hse-菌株选育解除Lys反馈抑制突变株; (3) Hse脱氢酶渗漏缺陷型突变株 日本椎尾等人 黄色短杆菌 突变株 ;(4) Lys 生产菌种遗传标记及Lys产量 谷氨酸棒杆菌 Hse－ K.Nakyama 13g/L Hse－AECR 中山清（日本） 42g/L 黄色短杆菌 Hse－AECRCSIFps I.shiio 51g/L (CSI:柠檬酸合成酶抑制；Fps：氟代丙酮酸敏感) 黄色短杆菌 AIII Hse-AECr 徐所维 50-55g/L 钝齿棒杆菌 pI-3-2 Hse-AECr 陈琦 50g/L; (5) 乳糖发酵短杆菌Lys代谢控制发酵 Lys合成与调控机制基本同于谷氨酸棒杆菌、黄色短杆菌。 特殊调控：代谢互锁调控机