《现代生物技术制药》课程考试大纲（专升本考试）.docVIP

PAGE 1 《现代生物技术制药》课程考试大纲 一、考试教材 1、生物技术制药（第2版）夏焕章，熊宗贵编，高等教育出版社。 2、生物技术制药（第2版）王凤山主编，人民卫生出版社。 二、考试方式 闭卷，笔试，考试时间120分钟。 三、考试大纲 第一章 绪论 需要掌握的知识点： 1、生物技术药物的概念：一般来说，采用DNA重组技术或其他生物技术研制的蛋白质或核酸类药物。 2、生物药物按其功能用途的分类：（1）治疗药物；（2）预防药物；（3）诊断药物。 3、生物技术药物的主要特性：（1）分子结构复杂；（2）具有种属特异性；（3）治疗针对性强，疗效高；（4）稳定性差；（5）基因稳定性；（6）免疫原性；（7）体内的半衰期短；（8）受体效应；（9）多效性和网络效应；（10）检的特异性。 4、生物技术制药的特性：高技术；高投入；长周期；高风险；高收益。 第二章 基因工程制药 1、了解主要的生物技术药物的类型：主要是指医用活性蛋白和多肽类，包括：（1）免疫性蛋白，各种抗原和单克隆抗体等；（2）细胞因子，如各种干扰素、白细胞介素、集落刺激生长因子、表皮生长因子及凝血因子等；（3）激素，如胰岛素、生长激素、心钠素等；（4）酶类，如尿激酶、链激酶，葡激酶，组织型纤维蛋白溶酶原激活剂及超氧化物歧化酶等。 2、举例我国科学家基因工程药物的成就：成功地研制出世界上第一个采用中国健康人白细胞中克隆的A1B型干扰素基因，组建杂交质粒，传染大肠杆菌使之高效表达的人A1B干扰素。 3、掌握以下几个概念： （1）融合蛋白：融合蛋白的氨基端是原核序列，羧基端是真核序列，这样的蛋白质是由一条短的原核多肽和真核蛋白结合在一起的。 （2）非融合蛋白：是指在大肠杆菌中表达的蛋白以真核的mRNA的AUG为起始，在其氨基端不含任何细菌多肽序列。 （3）接种量：是指移入的种子液体积和培养液的体积的比例。 4、掌握基因工程药物制造的主要步骤 获得目的基因→组建重组质粒→构建基因工程菌→培养工程菌→产物分离纯化→除菌过滤→半成品检定→成品检定→包装。 5、掌握反转录法克隆基因的主要步骤 （1）mRNA的纯化；（2）CDNA第一链的合成；（3）CDNA第二链的合成；（4）CDNA克隆；（5）将重组体导入宿主细胞；（6）CDNA文库的鉴定；（7）目的CDNA的分离和鉴定。 6、真核细胞mRNA的纯化方法 真核细胞mRNA结构特点：3 ˊ -polyA（20-250AAA），通过该机构特点可以知道：-oligo(dT)与3 ˊ -polyA（20-250AAA）配对，形成氢键结合，这样可以建立真核细胞的纯化方法。 具体步骤为： （1）合成Oligo(dT)，并与与 纤维素结合，制备Oligo(dT)-纤维素复合材料，作为分离介质； （2）将Oligo(dT)-纤维素复合材料装柱，RNA提取液上样，Poly(A)--Oligo(dT)配对结合； （3）用高浓度（100mM）NaCl 洗脱, 将rRNA/tRNA 洗脱； 用低浓度（10mM）Tris -（1mM） EDTA溶液洗脱，获得纯化的Poly(A)mRNA。 7、了解目前克隆真核基因常用的方法 化学合成和反转录法。 8、了解基因表达的宿主细胞 （1）原核生物细胞，目前常用的有大肠杆菌，枯草芽孢杆菌，链霉菌。 （2）真核生物细胞，常用的有酵母，丝状真菌。 目前使用最广泛的宿主菌是大肠杆菌和酿酒酵母。 9、影响目的基因在大肠杆菌中表达的因素 （1）外源基因的剂量； （2）外源基因的表达效率：包括启动子的强弱、核糖体结合位点的有效性、SD序列和起始密码的间距、密码子组成等因素。 （3）表达产物的稳定性； （4）细胞的代谢负荷； （5）工程菌的培养条件。 10、了解质粒的不稳定的类型 分为分裂不稳定和结构不稳定。 分裂不稳定指工程菌分裂时出现一定比例不含质粒子代菌的现象。是指工程菌分裂时出现一定比例不含质粒的子代菌的现象，它主要与两个因素有关，一是含质粒菌产生不含质粒子代菌的频率，质粒丢失率与宿主菌，质粒特性和培养条件有关；二是这两种菌比生长速率差异的大小。 结构不稳定：指外源基