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AHI基因启动子的克隆及转录活性的鉴定; 立论依据;AHI1基因
基因结构：6q23.2，含有28个外显子
表达部位：成年人小脑和大脑皮质中高表达
当前进展：至今AHI1基因的表达调控机制尚不清楚. ．
研究内容：本课题拟通过研究AHI1的转录调控机制，以揭示Joubert综合征的发生机理和神经系统发育过程中神经元穿越中线的分子机制．
; 研究方法; 技术路线;
㈡重组克隆不同长度的5’端侧翼序列
①根据预测的启动子位置设计上游下游引物。
②通过PCR扩增含有启动子的不同长度5’端侧翼序列。
③以pEGFP-1质粒为载体，重组克隆不同长度5’端侧翼序列．
; ㈢转染真核细胞cos-7，通过分析绿色荧光蛋白表达的有无和亮度确定具有转录活性的序列． ;㈣通过生物信息学分析能与具有转录活性的序列相结合的调节因子，以EMSA法验证．
EMSA ( Electrophoretic
Mobility Shift Assay,
电泳迁移率实验)
;㈤将分别含有调节因子ORF和调控活性序列的重组子共转染cos-7，通过分析绿色荧光蛋白表达的有无和亮度，分析调节因子对AHI1基因转录的影响．
实验设计：
①对照组：含AHI1启动子序列的重组pEGFP-1转染COS-7
②实验组：
AHI1启动子序列的重组pEGFP-1
编码调节因子ORF的重组子; 预期结果;;感谢观看！
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