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蛋白沉淀反应 第1页/共13页 ʺ实验目的 ⃔了解蛋白质的两性解离性质 ⃔学习测定蛋白质等电点的一种方法 ⃔加深对蛋白质溶液稳定因素的认识 ⃔了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义 第2页/共13页 ₪蛋白结构改变可导致其溶解度发生改变 ◆ 在pHpI时，蛋白带负电，蛋白分子相互排斥,蛋白呈溶解状 ◆ 在pHpI时，蛋白带正电，蛋白分子相互排斥,蛋白呈溶解状态 ʺ 实验原理 ◆ 在pH=pI时，蛋白不带电，蛋白溶解度最低(注:不一定沉淀) ⃑⃑ 蛋白的可逆沉淀: 结构可以恢复(非变性) ⃑蛋白带电性质的改变所引起的溶解度发生改变 第3页/共13页 ⃑⃑ 蛋白的不可逆沉淀: 结构不可以恢复(变性) ⃑ 蛋白经高温加热 ⃑ 盐析和特定条件下的乙醇作用(低温和短时间) ⃑ 蛋白和重金属作用: 如硝酸银 ⃑ 蛋白和某些有机酸作用:如三氯乙酸 第4页/共13页 ʺ试剂和器材 ₪试剂 新鲜鸡蛋 0.4%酪蛋白醋酸钠溶液 取0.4g酪蛋白，加少量水在乳钵中仔细地研磨，将所得的蛋白质悬胶液移入200mL锥形瓶内，用少量40-50℃的温水洗涤乳钵，将洗涤液也移入锥形瓶内。加入10mL 1mol/L醋酸钠溶液。把锥形瓶放到50℃水浴中，并小心地旋转锥形瓶，直到酪蛋白完全溶解为止。将锥形瓶内的溶液全部移到100mL容量瓶内，加水至刻度，塞紧玻塞，混匀。 1.00mol/L、 0.10 mol/L、 0.01 mol/L醋酸溶液 第5页/共13页 蛋白质溶液  5%卵清蛋白溶液或鸡蛋清的水溶液（新鲜鸡蛋清 ：水=1:9） pH4.7醋酸—醋酸钠的缓冲溶液 100mL 3%硝酸银溶液 10mL 5%三氯乙酸溶液 50mL 95%乙醇 250mL 饱和硫酸铵溶液 250mL 硫酸铵结晶粉末 0.1mol/L盐酸溶液 300mL 0.1mol/L氢氧化钠溶液 300mL 0.05mol/L碳酸钠溶液 300mL 甲基红溶液 20mL 第6页/共13页 ₪器材 水浴锅 温度计 200mL锥形瓶 100mL容量瓶 吸管 试管及试管架 乳钵 第7页/共13页 ʺ 实验操作 ₪酪蛋白等电点的测定 取同样规格的试管4支，按下表顺序分别精确地加入各试剂，然后混匀。 试管号 蒸馏水 0.01 mol/L醋酸 0. 1 mol/L醋酸 1. 0 mol/L醋酸 pH 混浊程度 (mL) (mL) (mL) (mL) 1 8.4 0.6 — — 5.9 2 8.7 — 0.3 — 5.5 3 8.0 — 1.0 — 4.7 4 7.4 — —