(5)--植物组织培养实验指导.pdfVIP

植物组织培养实验指导 实验一 实验室构成及常用设备和器皿的基本使用方法 （2 学时） 一、实验目的 了解植物组织培养所需设备及必要的实验环境条件，对植物组织培养实验室有一个总体认识。 二、实验室基本组成 化学实验室、药品室、称量室、培养基配制室、 洗涤室、灭菌室、无菌操作室 （具备超净工作台等） 培养室 （有控温设备、计时设备、照明设备、加湿设备、通风设备） 细胞学观察室 （各类显微镜） 驯化移栽室 （可以是植物生长室、温室等）。 三、常见设备使用及注意事项 酸度计、水浴锅、超净工作台、显微镜、恒温箱烘箱、空气调节器、冰箱 振荡和旋转培养机（用于细胞和愈伤组织液体培养） 天平（感量为0.1、0.01、0.001、0.0001） 灭菌设备：高压蒸汽灭菌锅（半自动、全自动）、专用电热灭菌器、过滤灭菌器 四、常用玻璃器皿的使用和洗涤 培养器皿包括：1.试管；2.三角瓶；3.培养皿；4.果酱瓶或罐头瓶；5.太空玻璃杯等 盛装容器包括：1.分注器（最简单的是在铁架上固定一个漏斗，通过漏斗直接分注）、2.离心 管；3.磨口瓶（包括无色和棕色两类，用于储存试剂，分装母液）、4.滴瓶（盛装酸液或碱液，用 于调节培养基的pH 值）、5.锅具（用于配置和熬制培养基） 计量容器包括：1.容量瓶：用于配制培养基，定容时使用。规格有 50-1000ml 不等。2.移液管 和移液枪：用于吸取各种母液和激素溶液。移液管规格有 0.1-10ml，移液枪有 1-1000ul 不等。3. 量筒：规格有5-1000ml 不等。 其它玻璃器皿如称量瓶、酒精灯、玻璃棒等 新购入的玻璃器皿只有在彻底清洗之后才能使用，一般可用1%左右浓度的稀盐酸将可溶性无机 物除去，也可用洗涤剂洗涤。洗干净的器皿应都应口朝下放置于烘箱内，在75℃下干燥或在常温下 晾干，然后贮存于防尘橱中。 五、小型器械用具 植物材料处理接种工具：镊子、剪刀、解剖刀、接种工具（包括接种针、接种钩及接种铲) 1 钻孔器、细菌过滤器 其他用具：如酒精灯、磁力搅拌器、微波炉、试管架、托盘等 *组织培养实验室基本实验技术 （参见教材相关部分，稼丰公司网页） 思考问题：植物组织培养所需要的基本实验条件有哪些？ 2 实验二 MS 培养基母液制备与保存 （2 学时） 一、实验目的 学习和掌握培养基母液配制的基本方法和技能，并为培养基制备作好准备工作。 二、实验试剂 MS 培养基母液的配制 大量元素5 种、微量元素7 种、铁盐2 种、有机物4 种 （不含肌醇）（表1） 生长素：NAA （萘乙酸）、IBA （吲哚丁酸）、2,4-D 细胞分裂素：6-BA （6-苄基氨基嘌呤） 助溶剂：95%酒精、1 mol/L HCl 表1 MS 基本培养基母液配制表 母液 化合物 原配方量 扩大 称取量 母液体积 配制1L 培养应基 名称 名称 mg 倍数 （mg ） （mL ） 吸取量 大量元素 NH NO 1 650 20 33 000 1 000 50 （mL ） 4 3 KNO3 1 900 38 000 MS I KH PO 170