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毛细管电泳2研第1页/共64页 2023/6/272一、概述Generalization二、经典电泳分析法Traditional electrophoresis三、高效毛细管电泳分析法High performance capillary electrophoresis第一节概 述Generalization第2页/共64页 2023/6/273一 .概述 在电解质溶液中，位于电场中的带电离子在电场力的作用下，以不同的速度向其所带电荷相反的电极方向迁移的现象，称之为电泳。 1937年，Tiselius(瑞典)将蛋白质混合液放在两段缓冲溶液之间，两端施以电压进行自由溶液电泳，第一次将人血清提取的蛋白质混合液分离出白蛋白和α、β、γ球蛋白； 发现样品的迁移速度和方向由其电荷和淌度决定； 第一次的自由溶液电泳；第一台电泳仪； 1948年，获诺贝尔化学奖由于不同离子所带电荷及性质的不同，迁移速率不同，可实现分离。第3页/共64页 生物化学家蒂塞利乌斯 A.W.K.蒂塞利乌斯 Arne Wilhelm Kaurin Tiselius (1902－1971） 蒂塞利乌斯1925年从事胶体溶液中悬浮蛋白质的电泳分离研究。曾自制超速离心机测定蛋白质分子的大小和形状,并与斯韦德贝里合作发表了第一篇论文,报道了测定蛋白质淌度的新方法。1930年他进一步改进实验手段和装置,发表了关于色谱法和吸附的论文。1935年改建原有电泳装置,发展了区带电泳法,大大提高了效率和分辨率。1940年他用自己设计的新电泳装置成功地分离了血清中蛋白质的4个组分,分别命名为:白蛋白α、β、γ和球蛋白。该法迅速应用于分离和鉴定各种复杂蛋白质及其他天然物质的混合物的组成。他因对电泳分析和吸附方法的研究,特别是发现了血清蛋白的组分而获得1948年诺贝尔化学奖。 第4页/共64页 第5页/共64页 2023/6/276二.经典电泳分析 利用电泳现象对某些化学或生物物质进行分离分析的方法和技术叫电泳法或电泳技术。 按形状分类：U型管电泳、柱状电泳、板电泳； 按载体分类：滤纸电泳、琼脂电泳、聚丙烯酰胺电泳、自由电泳； 传统电泳分析：操作烦琐，分离效率低，定量困难，无法与其他分析相比。 1981年，Jorgenson和Luckas，用75 μ m内径石英毛细管进行电泳分析，柱效高达40万/m，促进电泳技术发生了根本变革，迅速发展成为可与GC、HPLC相媲美的崭新的分离分析技术——高效毛细管电泳。第6页/共64页 2023/6/277三.高效毛细管电泳分析高效毛细管电泳在技术上采取了两项重要改进： 一是采用了小内径（50 μ m ， 75 μ m ）的毛细管, 二是采用了高达数千伏的电压。 毛细管的采用使产生的热量能够较快散发，大大减小了温度效应，使电场电压可以很高。 电压升高，电场推动力大，又可进一步使柱径变小，柱长增加， 高效毛细管电泳的柱效远高于高效液相色谱，理论塔板数高达几十万块/米，特殊柱子可以达到数百万。第7页/共64页 2023/6/278高效毛细管电泳的特点1.仪器简单、易自动化 电源、毛细管、检测器、溶液瓶2.分析速度快、分离效率高 在3.1min内分离36种无机及有机阴离子，4.1min内分离了24种阳离子；分离柱效：105～107/m理论塔板数.3.操作方便、消耗少 进样量极少，水介质中进行.4.应用范围极广 有机物、无机物、生物、中性分子；生物大分子等； 分子生物学、医学、药学、化学、环境保护、材料等. 第8页/共64页 2023/6/279一、HPCE基本原理Basic principles of HPCE二、电渗现象与电渗流Electroosmosis and electroosmotic flow三、影响电渗流的因素Factors influenced electroosmosis四、淌度Mobility五、HPCE中的参数与关系式Parameters and relation in HPCE六、影响分离效率的因素Factors influenced separation efficiency第二节高效毛细管电泳理论基础Basic theory of HPCE第9页/共64页 2023/6/2710 一、高效毛细管电泳(HPCE)基本原理 Basic principles of HPCE 电泳是指带电离子在电场中的定向移动，不同离子具有不同的迁移速度，迁移速度与哪些因素有关？ 当带电离子以速度ν 在电场中移动时，受到大小相等、方向相反的电场推动力和平动摩擦阻力的作用。电场力：FE = qE 阻 力：