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细胞周期与调控;第十一章 细胞增殖及其调控;细胞增殖的意义;§1 细胞周期与细胞分裂;1.1 细胞周期概述;1.1.1 细胞周期;2. 细胞周期时相组成： 间期（interphase） G1 phase、S phase、G2 phase M phase 有丝分裂期（mitosis） 胞质分裂期（cytokinesis） ;细胞沿着G1→S→G2→M→G1周期性运转，在间期细胞体积增大（生长），在M期细胞先是核分裂，接着胞质分裂，完成一个细胞周期。;3. 细胞周期时间 不同细胞的细胞周期时间差异很大； S+G2+M 时间变化较小，时间长短主要差别在G1期； 有些分裂增殖的细胞缺乏G1、G2期。;4. 细胞分类 根据增殖状况，细胞分为三类： 连续分裂细胞（cycling cell）：如表皮生发层细胞、部分骨髓细胞。 休眠细胞（G0细胞）：暂不分裂，但在适当的刺激下可重新进入细胞周期，如淋巴细胞、肝、肾细胞。 终末分化细胞：不可逆地脱离细胞周期，不再分裂的细胞，又称终端细胞，如神经、肌肉、多形核细胞。;1.1.2 细胞周期中不同时相及主要事件;1. G1期： 与DNA合成启动相关，开始合成细胞生长所需要的多 种蛋白质、RNA、碳水化合物、脂等，同时染色质去凝 集。 2. S 期： DNA复制与组蛋白合成同步，组成核小体串珠结构。;Experimental demonstration of the coordinated Synthesis of DNA and histones.;3. G2期： DNA复制完成，在G2期合成一定数量的蛋白质和 RNA分子。 4. M 期： 细胞分裂期，真核细胞的细胞分裂主要包括：有 丝分裂和减数分裂。遗传物质和细胞内其他物质分 配给子细胞。;1.1.3 细胞周期长短测定;标记有丝分裂百分率法原理(Percentage Labeled Mitoses, PLM) 对测定细胞进行脉冲标记、定时取材、利用放射 自显影技术显示标记细胞，通过统计标记有丝分裂 细胞百分数的办法来测定细胞周期。 ;有关名词 TG1：G1期的持续时间； TG2：G2期的持续时间； TS：S期的持续时间； TM：M期的持续时间； TC：一个细胞周期的持续时间； PLM：被标记分裂期细胞占所有分裂期细胞的百分比； TDR：胸腺嘧啶核苷，是DNA的特异前体，能被S期细胞摄入，而掺进DNA中。通常使用3H或者14C标记的TDR。;测定原理 待测细胞经3H-TDR标记后，所有S期细胞均被标记。 S期细胞经G2期才进入M期，所以起初PLM=0。 开始出现标记M期细胞时，表示处于S期最后阶段的细胞，已渡过G2期，所以从PLM=0到出现PLM的时间间隔为TG2。;S期细胞逐渐进入M期，PLM上升，到达到最高点的时候说明来自处于S最后阶段的细胞，已完成M，进入G1期。所以从开始出现M到PLM达到最高点的时间间隔就是TM。 当PLM开始下降时，表明处于S期最初阶段的细胞也已进入M期，所以出现LM到PLM又开始下降的一段时间等于TS。 从LM出现到下一次LM出现的时间间隔就等于TC，TC=TG1+TS+TG2+TM，即可求出TG1长度。;第20页/共101页;事实上由于一个细胞群体中TC和各时相不尽相同，第一个峰常达不到100%，以后的峰会发生衰减，PLM不一定会下降到零，所以实际测量时，常以（TG2+1/2TM）-TG2的方式求出TM。 ;1.1.4 细胞同步化;1. 自然同步化 多核体：如粘菌只进行核分裂，而不发生胞质分裂，形成多核体。疟原虫也具有类似的情况。 某些水生动物的受精卵：如大量海参卵受精后，前9次细胞分裂都是同步化进行的。 增殖抑制解除后的同步分裂：如真菌的休眠孢子移入适宜环境后，它们一起发芽，同步分裂。;2. 选择同步化 有丝分裂选择法 使单层培养的细胞处于对数增殖期，此时分裂活 跃，有丝分裂细胞变圆隆起，与培养皿附着性低， 轻轻振荡，M期细胞脱离器壁，悬浮于培养液中，收 集培养液，再加入新鲜培养液，依法继续收集，可获 得一定数量的中期细胞。优点：操作简单，同步化程 度高，细胞不受药物伤害；缺点：效率低(占1%～2%) 密度梯度离心法 不同时期的细胞体积不同，而细胞在给定离心场中 沉降的速度与其半径的平方成正比。优点：用于任 悬浮培养的细胞，缺点：同步化程度较低。 ;3. 诱导同步法 DNA合成阻断法 (G1/S-TdR双阻断法) 最终将细胞群阻断于G1/S交界处。优点：同步化 效率高，几乎适合于所有体外培养的细胞体系；缺 点：诱导过程可造成细胞非均衡生长，个别细胞体 积增大。 分裂中期阻断法 通过抑制微管聚合来抑制细胞分裂器的