碳水化合物的测定.pptVIP

式中：w--试样中还原糖的含量，% m1---查表得还原糖质量，mg m2---试样质量或体积，g 或mL V----测定用试样溶液的体积，mL 250----试样处理后的总体积，mL 第二十九页，共七十八页，2022年，8月28日 ①适用于各类食品中还原糖的测定，有色样液不受限制 ②此法所用碱性酒石酸铜溶液是过量的，煮沸后的反应液应呈蓝色(酒石酸钾钠铜络离子)。如不呈蓝色，说明样液含糖浓度过高，应调整样液浓度。 ③ 所用的碱性酒石酸铜溶液与直接法不同。 ④在过滤及洗涤氧化亚铜沉淀的整个过程中，应使沉淀始终在液面以下，避免氧化亚铜暴露于空气中而被氧化。 （5）说明与讨论 第三十页，共七十八页，2022年，8月28日 3、萨氏法 第三十一页，共七十八页，2022年，8月28日 Cu2＋ + 还原糖 → Cu2O Cu2O + H2SO4 ＝ 2Cu+ + SO42－ + H2O KIO3+5KI+3H2SO4＝3K2SO4+3H2O+3I2 2Cu++I2＝2Cu2＋+2I－ I2+2Na2S2O3＝Na2S4O6+2NaI 原 理 第三十二页，共七十八页，2022年，8月28日 结果计算 第三十三页，共七十八页，2022年，8月28日 （1）该法是微量法，检出量为0.015-3mg。灵敏度高，重现性好。 （2）萨氏试剂中的NaSO4的作用是降低反应液中的溶解氧，避免生成的Cu2O重新被氧化。 （3）在加热和冷却时，要防止生成的Cu2O由于空气的对流再次被氧化，用玻璃球盖上试管口可以阻碍Cu2O的氧化。 说明与注意事项 第三十四页，共七十八页，2022年，8月28日 （4）由于不同的还原糖的还原能力及反应速度不同，反应时所需加热时间也不同（见下表） （5）注意淀粉的加入时间 （6）碘化钾不加在萨氏试剂中，使用前在加入 第三十五页，共七十八页，2022年，8月28日 第三十六页，共七十八页，2022年，8月28日 本法以Fe3+在碱性条件下与还原糖起反应： 2K3Fe(CN)6+R-CHO+2KOH=2K4Fe(CN)6+R-COOH+H2O （亚铁氰化钾）（糖酸） （二）铁氰化钾法 2K3Fe(CN)6+2KI+8CH3COOH=2K4 Fe(CN)6+I2+8CH3COOK 2Na2S2O3+I2=2NaI+Na2S4O6 第三十七页，共七十八页，2022年，8月28日 不能根据上述反应式直接计算出还原糖含量。 而是首先按公式计算出氧化还原糖时所用去的铁氰化钾的量，再通过查经验表的方法即可查得试样中还原糖的百分数 样品处理时，不能用乙酸锌和亚铁氰化钾作为澄清剂，以免亚铁氰化钾氧化引入Fe3+。可用中性乙酸铅澄清样品。 第三十八页，共七十八页，2022年，8月28日 （三）其他方法（比色法） 还原糖（或其反应产物）+显色剂→显色物质 比色测定 应用得较多有： 1、酚-硫酸法 葡萄糖或糖类物质 糠醛或糖醛衍生物 （单糖或多糖） 黄至橙色化合物 浓硫酸 脱水 苯酚 第三十九页，共七十八页，2022年，8月28日 2、3，5—二硝基水杨酸（DNS）比色法 还原糖 + DNS 有色物 (黄色) (棕红色) 3、半胱氨酸-咔唑法 糠醛或其衍生物+半胱氨酸咔唑试剂→有色络 合物（560nm最大吸收） 适用于葡萄糖、果糖共存时的果糖测定。 NaOH,丙三醇 第四十页，共七十八页，2022年，8月28日 三、蔗糖的测定 蔗糖属非还原性糖，但可水解为一个葡萄糖和一个果糖，称为转化糖，可用还原糖法测。 对于纯度较高的蔗糖溶液，也可用相对密度法、析光法，旋光法等物理法测定。 第四十一页，共七十八页，2022年，8月28日 （一）盐酸水解法（GB/T5009.8) C12H22O11 + H2O → 2C6H12O6 （蔗糖，342） （转化糖，360） 故由转化糖的含量换算成蔗糖含量时，应乘以系数：342/360=0.95 第四十二页，共七十八页，2022年，8月28日 1、原理 样品 脱脂 提取 澄清剂 蛋白质等杂质 样品提取液 盐酸 水解 还原糖溶液 还原糖测定 还原 糖测定 脱脂样 品处理液 水或乙醇 提取液 第四十三页，共七十八页，2022年，8月28日 2、测定步骤 样品 预处理 样品处理液 样品50mL，定容100mL 样液50mL 还原 糖测定 5mL6mol/L 盐酸 6