酶制剂生产工艺学..docx

酶制剂生产工艺学 酶工程 酶：酶是由活细胞产生的，在细胞内、外一定条件下都能起催化作用的具有高效率和高度专一性的一类特殊蛋白质，酶能在机体内十分温和的条件下高效率地起催化作用，使得生物体内的各种物质处于不断的新陈代谢中。（核酶是唯一的非蛋白酶。它是一类特殊的RNA，能够催化RNA分子中的磷酸酯键的水解及其逆反应。） 酶工程：利用酶或细胞的催，化作用，在特定的生物反应器中，将原料转化成所需的产品并应用于社会生活的一门科学技术。 转换数（Kcat）:又称分子活性，或摩尔催化活性，指单位时间内，酶分子中每个活性中心或每个酶分子所能转化的底物分子数，单位为1/min。是酶催化效率的一个指标。（催化周期 （T） : 指酶进行一次催化所需的时间，为转换数的倒数，单位为毫秒(ms)或微秒(μs)。） 比活力：可用来表示酶制剂的纯度或活力的高低，是酶纯度的一个指标。在特定条件下，单位质量的酶（蛋白或RNA )所具有的酶活力单位数称为酶的比活力（specific activity）。（酶的比活力 = 酶活力（U）/mg（蛋白或RNA )） 酶活力：又称酶活性，是指酶催化某一化学反应的能力，酶活力可用酶催化的某一化学反应的速率来表示。化学反应的速率可用单位时间内底物的减少量或产物的增加量来表示。 酶活力单位（U）: 表示酶量多少的单位，在特定条件下，每分钟催化1umol的底物转化为产物的酶量。（1961年国际生物化学学会酶学委员会） 酶活国际单位：即催量（kat），在最适条件下，每秒钟催化1mol的底物转化为产物的酶量。（1972年国际酶学委员会）1kat = 1mol/s = 60mol/min = 6×107U 酶反应动力学：研究酶反应速度规律以及各种因素对酶反应速度影响的科学。 简要回答酶的催化特点。 答;1.催化效率高;2.专一性强;3.反应条件较温和;4.活性可以调节 补充：1.酶的催化速率是没有催化剂催化的化学反应速率的1012～1020倍，比一般催化剂催化反应的速率高107～1013倍 。 绝对专一性：只作用于一种底物；相对专一性：作用于一类化合物或一类化学键；立体异构专一性：旋光异构专一性、几何异构专一性 酶促反应受一系列外界理化性质的影响，如：①底物浓度及酶与底物的相对浓度；②温度；③pH值； ④激活剂；⑤抑制剂；⑥强酸/强碱；⑦重金属盐；⑧紫外线等。 4.酶调节：酶活性的调节；酶合成的调节。 酶的分类与命名 答：国际系统分类法：1.氧化还原酶类；2.转移酶类；3.水解酶类;4.裂解酶类;5.异构酶类;6.合成酶类 EC（Enzyme Commission）命名法：ECx.y.z.n（x：酶所属大类1~6；y：大类下的亚类；z：各亚类下的亚亚类；n：亚亚类下的具体的个别酶的顺序号）x,y,z编号中的前三个数字表明了该酶的特性如反应物的种类、反应的性质。 简要回答影响酶催化作用的因素。 答：1.底物浓度的影响（矩形双曲线：一级反应；混合反应；零级反应。底物抑制：有些酶在高底物浓度下，速度没有维持较高水平，反而下降的现象）；2.产物浓度的影响（反馈调节作用：许多代谢途径的中间产物或终产物是酶的变构剂，使酶变构从而影响其反应速度）；3.酶浓度的影响（在底物浓度足够高的条件下，酶催化反应速度与酶浓度成正比）；4.温度的影响；5.pH的影响；6.抑制剂(inhibitor)的影响；7. 激活剂(activator)的影响 简要回答米氏方程、米氏常数的意义。 答：米氏方程的意义：（1）通过酶反应动力学常数可以反映出反应性质、反应条件、反应速度之间的关系（2）反映出反应速度与底物浓度之间的关系。（3）反映出反应速度与酶浓度之间的关系。 米氏常数的意义:（1）Km是酶的一个特性常数，Km大小只与酶性质有关，而与酶浓度无关。当底物确定，反应温度，pH及离子强度一定时，Km值为常数，可用来鉴别酶。（2）Km值可用于判断酶的专一性和天然产物，若一个酶有几种底物就有几个Km值，其中Km值最小的底物称为该酶的最适底物，又称天然底物。（3）1 / Km可近似表示酶与底物亲和力的大小。（4）已知Km可由[S]计算v，或由v计算[S]。 （5）Km可帮助推断某一代谢反应的方向和途径。 可逆抑制的酶动力学 答：竞争性抑制:Km值增大，Vm值不变；非竞争性抑制：Km值不变，Vm值降低。反竞争性抑制：Km减小，Vm降低。 补充：1.抑制剂：指能降低酶的活性，使酶促反应速率减慢的物质。 抑制作用：抑制剂与酶分子的必需基团结合后，使这些基团的结构和性质发生改变，从而引起酶活力下降或丧失。 以上作用相反的：激活剂、激活作用 （1）不可逆的抑制作用：抑制剂与酶以共价键结合，不能用透析、超滤等物理方法去除抑制剂而使酶复活。（2）可逆的抑制作用：抑制剂与酶以非共价键结合，可