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薄层层析操作要点 铺板 铺板用的匀浆不宜过稠或过稀：过稠，板简洁消灭拖动或停顿造成的层纹；过稀，水蒸发后，板外表较粗糙。匀浆配比一般是硅胶 G:水=1：2～3，硅胶 G:羧甲基纤维素钠水溶液=1:2。研磨匀浆的时间， 依据阅历来定，与空气湿度有关，一般通过拿起研棒时匀浆下滴的状况来推断，越稠越难下滴。匀浆的稀稠除影响板的平滑外，也影响板涂层的厚度，进一步影响上样量。涂层薄，点样易过载；涂层厚，显色不那么明显。通常，板的质量对薄层鉴别的影响不是很大，影响最大的是开放剂的配制和开放系统的饱和。 铺层时防止起泡,可加几滴乙醇. 尝试刮边 点样 尽量用小的点样管。假设有足够的耐性，最好只用 1 微升的点样管。这样，点的斑点较小，开放的色谱图分别度好，颜色清楚。样品溶液的含水量越小越好，样品溶液含水量大，点样斑点集中大。样品溶液的溶剂一般是无水乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯。点好样的薄层板用电吹风的热风吹干或放入枯燥器里晾干。 点样是造成TLC 定量误差的主要来源。试验证明：定量毛细管更适合较小体积的点样；微量注射器更适合较大体积的点样。这主要是由于微量注射器受小气泡、溶液回爬现象的影响较大。为避开不同定量毛细管间的点样误差、建 议一块薄层板上最好用同一只定量毛细管。但应留意更换样品时，应将毛细管用超声波或不同极性溶剂清洗干净。在 制备样品时，溶样溶剂黏度不能过高，以便于点样；溶剂沸点过低则进样体积易变，过高则会转变开放剂组成；对样 品溶解度过高会使样点发生空心现象；常用的溶剂为甲醇、乙醇、丙酮。经典 TLC 样点原点一般为直径 3mm 点间距 1-2cm 底边距 1.5cm；HPLC 样点原点一般为直径 1mm 点间距 5mm 底边距 1cm。 开放剂配制 选择适宜的量器把各组成溶剂移入分液漏斗，猛烈振摇使混合液充分混匀，放置，假设分层，取用体积大的一层作为开放剂。确定不应当把各组成溶液倒入开放缸，振摇开放缸来配制开放剂。混合不均匀和没有分液的开放剂，会造成层析的完全失败。各组成溶剂的比例准确度对不同的分析任务有不同的要求，尽量到达试验室仪器的最高准确度，比方：取 1ml 的溶剂，应使用 1ml 的单标移液管，移液管应符合计量认证要求，尽管多数时候这不是必需的。 开放系统的饱和 一般使用的是双槽的开放缸，一槽用来放开放剂，另一槽可参加氨水或硫酸。把待开放的板放入两槽间的平台，斜架着，盖上开放缸的盖子。让开放剂的蒸气布满开放缸，并使薄层板吸附蒸气到达饱和， 防止边沿效应，饱和时间在半个小时左右。开放时难免要翻开盖子把薄层板放入开放剂中，不过对薄层板与蒸气的吸附平衡影响不大，固然动作应当尽量轻、快。 温湿度的掌握 温湿度对薄层影响都很大。不冻结的前提下，通常温度越低分别越好，较难的分别需在低温下分别， 例如人参皂苷。湿度的影响，估量主要是影响薄层板的吸附力量，导致选择性〔容量因子〕的变化，湿度应依据实际状况确定。温度掌握使用空调器或冰柜，湿度掌握是通过在另一开放槽放置相应浓度的硫酸。 开放剂的选择 TLC 与 HPLC 相比，一个突出的优点就是流淌相的选择具有更大的敏捷性。流淌相的选择的目的是使绝大局部样品的RF 值位于 0.1--0.7 之间并到达较好的分别，与此对应的是流淌相要有适当的强度和组成。流淌相强度越大，溶质RF 值越大，但很可能降低分别力量；另外单一溶剂很难分别较简单的混合物，依据相像相溶原理，要使用多元溶剂体系。 一般开放剂体系选择如下：依据分别样品性质、薄层色谱板性质选择一个二元溶剂体系，通过调整溶剂比例以寻求适 合 RF 值，适合的RF 值找到后，再寻求极性参数一样的二元溶剂体系两个，以这三个组成为三点组成一个三角形，则可看到：三角形顶点是二元体系，边是三元体系，三角形内是四元体系，并且极性全都，可依据几何原理得出任一点 组成。这种方法较为直观，也较简洁。 显色 喷显色剂显色最重要是有好的雾化器。 TLC 的通用显色方法 抱负的显色期望灵敏度高、斑点颜色稳定、斑点与背景间的比照度好、斑点的大小及颜色的深度与物质的量成正比。 在样品组成并不完全的状况下，通用显色方法显得成尤为重要。通用显色法主要有： 紫外照耀法：便利，不破坏样品； 碘蒸气法：通用性强，与紫外法结合灵敏度高于该两法单独使用； 荧光试剂：制造荧光背景，使原来紫外下无荧光物质被鉴别，有荧光物质更明显； 硫酸溶液：对绝大多数有机物有效，但有破坏性。 薄层层析(thin layer chromatography)，也叫薄层色谱、薄板色谱或薄板层析，属层析技术中的一类，常用TLC 代表。如同柱层析一样，按其作用机理可分为吸附薄层层析，安排薄层层析等。其中应用最广泛的是吸附薄层层析。 其原理见第 97～100 页和第 102～104 页。薄层层析具有微量、快速、操作简便等