目的基因的获得.pptxVIP

目的基因的获得第1页/共119页 第五章 目的基因的获得第2页/共119页 第五章 目的基因的获得　　　　对于高等真核生物而言，基因组DNA十分庞大,基因可达数万个，且基因组成结构复杂，除编码序列，还有非编码序列及调控序列，基因间还存在大量的间隔序列和重复序列，因此，单个目的基因在整个基因组中所占的比例极其微小，除少数例外，绝大多数基因难以直接分离得到。　　　为了解决这个难题，一种可行的方法就是将这个基因扩增，增加成功分离目的基因的可能性。但是由于要分离的目的基因往往是未知基因，因此无法对它进行特异性扩增，而只能对所有的基因进行扩增，也就是构建该生物材料的基因文库，然后再根据不同的方法将所需的克隆筛选出来，最后分离得到目的基因。第3页/共119页 第五章 目的基因的获得　基因文库(gene library)概念　　　又称DNA文库，是指某个生物的基因组DNA或cDNA片段与适当的载体在体外重组后，转化宿主细胞，并通过一定的选择机制筛选后得到大量的阳性菌落(或噬菌体)，所有菌落或噬菌体的集合即为该生物的基因文库。　按外源DNA片段的来源分基因文库分为：　　基因组DNA文库　　　　从特定组织提取的染色体基因组DNA　　cDNA文库　　　　mRNA反转录成的cDNA拷贝　　基因文库由外源DNA片段、载体和宿主组成。第4页/共119页 第五章 目的基因的获得第5页/共119页 一、 基因组