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首先了解样品的性质 第一页，共三十二页，2022年，8月28日 考虑相容性A.开始阶段样品体积、数量大 首先考虑高容量capacity，其次高分辨率resolution处理量小时则反之B.盐析后盐浓度高，影响离子交换色谱和电泳，需先进行透析或凝胶过滤脱盐。 1.分离方法的顺序 第二页，共三十二页，2022年，8月28日 C 分离的每个步骤选择不同性质的分离方法 D 最后分离条件注重复原性、快速，因为蛋白质越纯稳定性下降越快。 第三页，共三十二页，2022年，8月28日 2.初步纯化一般注意点：A. 温度B.避免极端I,pHC.有机溶剂D.蛋白质的浓度（高 稳定，因为蛋白质带负电，排斥力大）E.避免泡沫和膜的形成F.酶的活性 第四页，共三十二页，2022年，8月28日 6.纯化步骤的定量评价 3.选择性的纯化步骤 色谱法 4.检查纯化的进展情况 常用电泳（PAGE, SDS, IEF） 5.进一步纯化 根据4结果，若分子大小差异——GEC 若电荷差异——离子交换色谱 第五页，共三十二页，2022年，8月28日 7.在纯化过程中酶活力的损失主要原因：蛋白质变性 避免方法：改变温度和pH 其他原因：辅助因子被去除 第六页，共三十二页，2022年，8月28日 酶分离纯化的方案设计 The