生物样品验证指标和分析方法学考核.pdfVIP

第四节 生物样品测定方法的验证指标和分析方法的考核 任何一种分析测定方法，根据其使用的对象和要求，都应有相应 的效能指标。一般而言，常用的分析效能评价指标包括：精密度、准 确度、检测限、定量限、选择性、线性范围、重现性、耐用性等。生 物样品中药物分析方法评价的标准与上述评价指标之间，既有共同点 也有其独特之处，测定方法的效能指标可以作为对分析测定方法的评 价尺度，也可以作为建立新的测定方法的实验研究依据。与其他分析 方法相比，体内药物分析方法的可行性和可靠性，需要应用若干标准 来进行方法学的考察与评价。在实际工作中评价一个体内药物分析方 法的优劣，一般常用精密度、准确度、灵敏度、专属性或选择性及可 测浓度范围等指标进行考察。 一、生物样品测定方法的验证指标 (一)准确度准确度(accuracy)是指测得结果与真实值接近的程度， 表示分析方法测量的正确性，是考察和评价分析方法的最基本要点之 一。由于不可能绝对地确知样品的 “真值”，因而常用回收率数值反 映测定的准确程度。也可通过与其他已建立的分析方法进行比较等手 段来反映准确度。回收率是指将已知量的药物纯品加到空白生物基质 (如空白血浆、血清) 中，经过一系列的前处理、测定，计算所测得的 药物量与加入量的比值，以百分率表示。一般回收率数值越接近 100％，准确程度越好。生物药物分析中，常用标准添加法来计算回 收率，即取已准确测定药物含量P(present) 的真实样品(如人血浆样品 等)，再加入药物标准晶已知量A ．(added)，将该混合物作为测定液， 其测定值为 M(measured) 。测定液要配制成高、中、低三种浓度，每 个浓度测定3-5 次，求出每种浓度的平均测定值M，且RSD 应符合 要求。由于预先要准确测定样品中原含有的药物量P，因此也应测定 3-5 次，求其平均值P ，且RSD 也应符合要求。按上式计算出的回收 率，其结果越接近 100％表明分析方法准确度越高。生物样品分析时， 一般应将回收率范围控制在85％-115 ％(样品药浓≥2m 心L)及 80％ -120 ％(样品药浓200t~, ／L)o 但因生物样品组分复杂，药物含量低， 前处理步骤多很难达到较高的回收率。对一种分析方法来说，更重要 的是每次测得的回收率要保持恒定，虽然有时回收率较低，但只要重 现性好，通过校正后仍可采用。回收率根据测定方法不同，又可分为 绝对回收率和方法回收率。 1．绝对回收率。 绝对回收率又称为萃取回收率或提取回收率，它反映了一种方法 的萃取效率，与生物样品检测灵敏度有关，是评价体内药物分析方法 的重要指标之一。现以色谱为例说明绝对回收率的求算过程。分别取 一定量被测药物标准品两份，其中一份加到空白样品中，按设定方法 处理、进样测定，测得色谱峰面积为A ；另一份用纯品溶剂溶解并 测 稀释使其浓度与第一份处理后浓度一致，进样测得色谱峰面积为A ， 真 其回收率为：回收率( ％)=A ／A ×100％。绝对回收率应考察高、 测 真 中、低三个浓度，高浓度在标准曲线的上限附近，低浓度选择在定量 限附近，中间选一个浓度。对于回收率的大小与变异不宜苛求，一般 —6 -9g，绝对回收率若能达到 50％—80％，应该是令 添加量在 10 —10 人满意的。色谱分析中采用内标法测定含量，分别取相同量的药物标 准品和内标物质两份。其中一份加到空白样品中，按设定方法处理， 测得药物和内标峰面积，求出它们的比值=A ／A 。另一份用纯溶 药 内 剂溶液进样，测得药物和内标峰面积，计算其比值。然后根据下式求 出回收率：回收率( ％)=R ／R ×100％在内标法中，要求药物与内