生化工程第2章培养基灭菌.pptxVIP

生化工程 第二章 培养基灭菌 本章主要内容第一节 分批灭菌第二节 连续灭菌培养基灭菌程度N / N0培养基灭菌程度的要求因发酵系统而异。 某些培养过程，由于培养基中的基质不易被一般微生物利用,或温度、pH不适于一般微生物的生长，则对无菌程度要求低；但是有一些培养过程对无菌程度要求高，例如抗生素的生产过程。?第一节??? 分批灭菌一、微生物的热死灭动力学 对培养基进行湿热灭菌时，培养基中的微生物受热死亡（微生物体内蛋白质变性）的速率与残存的微生物数量成正比。 均相系统，它符合化学反应的一级反应动力学。ln(N/N0 ) = -K tK（比热死亡速率常数）由两个因素均定1、微生物的种类2、灭菌温度。杂菌营养物质ln(N/N0 ) = -K t ln(C/C0 ) = -Kd t △T ， △K， △ Kd也就是K对T的变化率是怎么样的？灭菌动力学的重要结论 细菌孢子热死灭反应的△E很高，而大部分营养物质热破坏反应的△E很低，因而将T提高到一定程度会加速细菌孢子的死灭速率，从而缩短在升高温度下的灭菌时间（ ln(N/N0 ) = - K t ）；由于营养成分热破坏的△E很低，上述的温度提高只能稍微增大其热破坏温度，但由于灭菌时间的显著缩短，结果是营养成分的破坏量在允许的范围内。第一节??? 分批灭菌二 分批灭菌的设计1、分批灭菌的操作 将配好的培养基打入发酵罐，通入蒸汽将培养基和所用的设备一起进行灭菌，也称实罐灭菌。优点：（1）不需专门的灭菌设备。（2）对蒸汽的压力要求较低，在3～4×105Pa（表压）就可满足要求。缺点：在灭菌过程中，蒸汽用量波动大，造成锅炉负荷波动大。 第一节??? 分批灭菌 二 分批灭菌的设计1、分批灭菌的操作 高压蒸汽锅第一节??? 分批灭菌 二 分批灭菌的设计2、分批灭菌的设计 要求绝对的无菌在工业上很难做到，因为： N=0，则e-kt= 0, 1/ekt= 0, ekt=∞, t=∞ 因此，绝对的无菌很难做到。第一节??? 分批灭菌 二 分批灭菌的设计 而且绝对的无菌也是不必要的，工程上只要求培养基中杂菌降低到合理的程度，然后进行细胞的培养，失败的可能性很小。 那么无菌程度降低到多少为好呢？ 有一个设计标准（判据）N0：未灭菌培养基的含菌数。N：灭菌后培养基中存活的菌体数， 第一节??? 分批灭菌 二 分批灭菌的设计常取N=10-3个/罐。它的意义是：灭菌103次，存活一个活菌孢子的机会为1次。例如：培养基100m3，含菌105个/ml,，要求灭菌后存活菌数10-3个/罐= 那么为计算方便 Ln（N0/N ）= 36.8 第一节??? 分批灭菌 二 分批灭菌的设计分批灭菌过程：升温、保温和降温，灭菌主要是在保温过程中实现的，在升温的后期和冷却的初期，培养基的温度很高，因而对灭菌也有一定贡献。T灭菌温度保温N1N2升温降温NN0Ln(N0 / N1)Ln(N2 / N)tot1t2t3timeLn(N1 / N2)Ln N0/N =36.8是总的判据，是由升温、保温、降温三段实现的ln （N0/N） =ln（ × × ） =ln +lnln N0/N +ln第一节??? 分批灭菌 二 分批灭菌的设计 在灭菌过程中，必需设计出灭菌过程的操作时间和温度。 首先根据培养过程对培养基无菌程度的要求提出无菌判据（ln ），然后依据所使用的灭菌设备，和设计出的灭菌温度和时间来计算出实际的ln ，看能否达到开始提出的无菌要求。T灭菌温度保温N1N2升温降温NN0ln(N0 / N1)ln(N2 / N)tot1t2t3timeln(N1/ N2)ln (N0/N1) = K(t1-t0)K是变数，t变化，T变化，K也变化。 升温段：T灭菌温度保温N1N2升温降温NN0ln(N0 / N1)ln(N2 / N)tot1t2t3timeln(N1 / N2)保温段：Ln(N1/N2)= K(t2-t1) T一定，K是常数。 降温段：这三个判据中，保温段可以算出，升温段和降温段不好办，因为不知道T和t之间的函数关系。是否有这样的函数关系呢？一些学者已经作出的常用的换热方式T-t关系式。第一节??? 分批灭菌 二 分批灭菌的设计除了这种积分方式以外，工程上还常用图解积分法，即从设计的T-t数据换算成K-t数据，进行图解积分。?t01103036435055106370102120140T3050901005812012011010090604433K00??00.030.363.593.590.360.03?0?0?0第一节??? 分批灭菌 二 分批灭菌的设计例如：某发酵罐分批灭菌最高温度120℃，保持5min，设计的温度