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液相色谱安捷伦1260操作规程 一、开机 1) 打开计算机。 2)??打开主机各模块电源（从上至下），待各模块完成自检后，再双击桌面图标，进入化学工作站。 3)??把各流动相放入溶剂瓶中。 4)??旋开排气阀（逆时针），右单击“四元泵”图标出现快捷键，点击“方法”选项进入泵编辑画面。将泵流量设到5ml/min，溶剂A设到100%，打开泵，排出管线中的气体2—3分钟，直到管线内由溶剂瓶到泵入口无气泡为止，查看柱前压力（若大于10 bar，则应更换排气阀内过滤白头）。 5)??依此切换到B、C、D溶剂分别排气。 6)??将泵的流量设到0.5ml/min，多元泵则再设定溶剂配比，如A=80%，B=20%；关闭排气阀（顺时针）。 7)??再将泵的流量设到0.8ml/min，2分钟后将泵的流量设到1ml/min，冲洗色谱柱20—30分钟。 8)??把缓冲液换成流动相，待柱前压力基本稳定后,打开检测器灯，观察基线情况。 二、数据采集方法编辑 1)?编辑完整方法：方法编辑完整方法去掉数据编辑√确定注释确定手动进样器确定设置泵的三个参数(1流速2溶剂比例3停止时间)设置柱温箱温度（组合）设置紫外波长确定确定方法另存为确定。 2)?编辑样品信息：调用方法样品信息选择存储文件夹设置样品名称运行方法 4)?进样：洗针进样25微升(进样环20微升)进样口lock将针放入进样口进样顺时针旋转至inj。 三、数据分析 (1)积分 调用信号积分积分事件设置最小峰面积（过滤掉小峰）确定（点击左面绿√图标）方法保存方法 (2)校正 文件调用信号选中标样文件名 校正校正设置设置参比峰时间和%，含量单位确定 校正新建校正表确定在表格中填写化合物名称和含量确定 方法保存方法 (校正添加级别) (校正添加峰可将不同色谱图中需要校正的峰添加到同一个校正表中，保存在同一个方法文件里) (3)打印 报告设定报告定量设定计算模式外标法 报告设置简短报告 四、仪器清洗 实验结束前先用5%的甲醇清洗，再用100%甲醇清洗20分钟三 关机 1)?关机前，用5%甲醇冲洗柱子和系统0.5—1小时，流量0.5-1ml/min，再用100%有机溶剂冲0.5小时（不要直接用纯甲醇清洗，盐不溶解于有机物，容易析出晶体堵塞色谱柱），然后关泵。 2)?退出化学工作站，及其它窗口，关闭计算机。 3)?关掉主机电源开关。 注意事项： 1)氘灯是易耗品，应最后开灯，不分析样品即关灯。 2)开机时，打开排气阀，100%水，泵流量5ml/min，若此时显示压力10bar，则应更换排气阀内玻璃料。 3)流动相使用前必须过滤，不要使用多日存放的蒸馏水（易长菌）。 4)流动相使用前必须进行脱气处理，可用超声波振荡10-15min。 5)配制90%水+10%异丙醇，以每分2—3滴的速度虹吸排出，进行seal-wash，溶剂不能干涸。 6) 当使用缓冲溶液时，要用水冲洗手动进样器进样口，同时搬动进样阀数次，每次数毫升。 7）软件指示灯：黄色：未就绪 绿色：就绪 蓝色：正在走样品 红色：异常 仪器指示灯：黄色：未就绪 绿色：正在走样品 无色：就绪 红色：异常 8）如果开始有气泡，把溶剂过滤头拔下去就没有气泡，说明溶剂过滤头堵了，若溶剂过滤头堵了，用35%硝酸浸泡一晚，用清水冲洗干净，再堵就换新的。（溶剂过滤头不能用超声处理）