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第一篇 专题十一 生物技术实践;直击考纲
1.微生物的分离和培养。
2.某种微生物数量的测定。
3.培养基对微生物的选择作用。
4.利用微生物进行发酵来生产特定的产物以及微生物在其他方面的应用。
5.从生物材料中提取某些特定的成分。
6.运用发酵加工食品的基本方法。
7.DNA的粗提取与鉴定。;静悟提纲;;1.微生物的培养;(2)倒平板操作
操作过程如图所示,操作时要待培养基冷却至50 ℃左右时,在酒精灯火焰附近进行。
制备固体培养基最后要将平板倒置,其主要目的是防止培养皿皿盖上的水珠滴入培养基造成污染。;(3)平板划线操作;(4)稀释涂布平板法:先将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面,进行培养。在稀释度足够高的菌液里,聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞,从而能在培养基表面形成单个菌落。如图所示:;2.某种微生物的分离与计数
(1)分离——选择培养基
①培养基中加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌。
②培养基中加入高浓度的食盐可得到金黄色葡萄球菌。
③培养基中缺乏氮源时,可以分离得到固氮微生物。
④当培养基的某种营养成分为特定化学成分时,也具有分离效果。
⑤改变微生物的培养条件,也可以达到分离微生物的目的,如将培养基放在高温环境中培养能得到耐高温的微生物。;(2)计数
①土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
a.筛选菌株:利用以尿素为唯一氮源的选择培养基筛选菌株。
b.计数方法:活菌计数法和显微镜直接计数法。前者为了增强实验的说服力和准确性,需设置重复组,一般选择菌落数在30~300的平板进行计数。
c.过程:土壤取样→样品的稀释→微生物的培养与观察。;②分解纤维素的微生物的分离
a.实验原理;(3)鉴定方法;3.微生物在传统发酵技术中的应用;实验
流程;题组一 微生物的培养和利用;(1)甲图中苯酚降解菌的富集培养基应含有蛋白胨、K2HPO4、MgSO4、苯酚和水,其中可作为碳源的有_______________。;解析 微生物培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐,此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。对异养微生物来说,含C、N的化合物既是碳源,也是氮源,即有些化合物作为营养要素成分时并不是起单一方面的作用。微生物常见的接种的方法有:①平板划线法:将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板,接种、划线,在恒温箱里培养。在线的开始部分,微生物往往连在一起生长,随着线的延伸,菌数逐渐减少,最后可能形成单个菌落;②稀释涂布平板法:将待分离的菌液经过大量稀释后,均匀涂布在培养皿表面,经培养后可形成单个菌落。
培养基成分中的有机物均可以提供碳源,即蛋白胨、苯酚均可以作为碳源。;(2)将采集到的样品接种培养,苯酚用量应随转接次数增加而逐渐__________,以达到获得苯酚高效降解菌的目的。应采用_____________
法来进行该菌种的计数与分离,统计的菌落数往往比活菌的实际数目要____。;(3)制备平板培养基时除了需要水、碳源、氮源、无机盐和特殊营养物质外,还必须添加______________。培养基的灭菌方法为______________。;(4)乙图为连续划线法示意图,在该图中____(填序号)区域最易获得单菌落。如需要长期保存该菌种,应采用甘油管藏的方法,保存温度为________。;1;解析 微生物接种最常用的两种方法是平板划线法和稀释涂布平板法。两种方法均可用于菌种的分离纯化,但若要对菌液中含有的活菌数进行计数,则只能用稀释涂布平板法,但这种方法得到的结果往往比实际结果偏低,原因是涂布时可能存在两个或多个细菌连在一起而形成一个菌落。其计算方法是:单位菌液中含有的细菌数=菌落数的平均值÷涂布菌液的体积×稀释倍数。
微生物接种最常用的两种方法是平板划线法和稀释涂布平板法。两种方法的所有操作都应在酒精灯火焰附近进行,目的是避免周围环境中微生物的污染。每次接种前后接种环都需要灼烧灭菌,因此若要在五个区域划线,共需灼烧接种环6次。;(2)用稀释涂布平板法对细菌进行计数时,所统计的菌落数往往会比实际数目偏小,原因是______________________________________________
__________。在5个平板上各接种稀释倍数为103的菌液样品0.1 mL,培养一段时间后,平板上的菌落数分别为48、50、52、54、330,则每升原菌液样品中细菌数为_________个。;(3)为防止人员感染和污染环境,实验人员离开实验室时,一定要做的事情有________________________、________________________________
________。;解析 腐乳制作有多种微生物参与,其中起主要作用的是毛霉。毛霉属于真核生物,
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