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基因治疗的课件资料;本章内容提示;基因治疗（Gene therapy?）;一、基因治疗策略 策略：直接基因治疗和间接基因治疗 1、直接基因治疗：纠正突变基因 在原位修复缺陷的基因，以达到治疗目的。为较理想的基因治疗策略，由于存在某些问题，目前正在努力之中。（未实现） ;2、间接疗法： 以正常的基因替代致病基因。 导入外源正常基因，代替有缺陷的基因。而 对靶细胞而言，没有去除或修复有缺陷的基因。 用DNA重组技术设法修复患者细胞中有缺陷的基因，使细胞恢复正常功能而达到治疗遗传病的目的。 ;途 径:; 1、生殖细胞基因治疗;但还存在某些问题：;2．体细胞基因治疗somatic cell gene therapy; 措 施：;存在的问题;二 、基因治疗的方法;基因治疗首先获得目的基因通常从基因组中分离 基因克隆 ↓ 定 位 ↓ 表 达 ↓ 评价表达情况;二）外源基因的转移;1）物理方法;（2）显微注射法（microinjection ）;例：转基因动物的制备;第18页/共53页;;（3）微粒子轰击法;2）化学法;磷酸钙+DNA → 混合微细颗粒 ↓ 沉淀反应20~30min ↓ 细胞在沉淀物中暴露 5~24h 方法简单，但转化效率低。;3）脂质体法（liposome）;4）同源重组法;通过同源重组定点插入珠蛋白基因;5）病毒介导基因内转移（Viral mediated transfer）; 逆转录病毒(RNA) 常用的病毒载体 DNA病毒 1) 逆转录病毒（retrovirus） 目前应用最多、最成功. 病毒感染细胞后，其基因组RNA 经逆转录产生双链DNA拷贝，插入宿主染色体形成前病毒（provirus），前病毒转录产生的正链既是病毒RNA，再与前病毒编码的外壳蛋白包装成新的病毒颗粒。 ;第28页/共53页;例如：小鼠白血病病毒（Mo-MLV）基因组结构：;逆转录病毒载体优点：;缺 点;③逆转录病毒有致癌作用，可能使受体细胞癌变。 根据逆转录病毒的缺点，人们有目的地将其改??，保留其优点，除去癌基因和病毒基因，保留LTR和ψ包装信号。 ;6）受体载体转移法;三）靶细胞的选择;常见的靶细胞;三、Gene治疗的现状与前景;具备下列条件;基因治疗实例;ADA-Gene + vector （逆转录病毒） 重组分子 患者T Ly C IL-2刺激C分裂 导入 细胞生长分裂 10天 Gene表达 回输患儿体内 1~2月治疗一次, 10个月 患儿体内ADA水平达正常人的25% ;2、乙型血友病;逆转录病毒载体 +FⅨcDNA 重组体 5` LTR FⅨ neo SV PSO LTR 3` ①导入仓鼠细胞（CHO ）→FⅨ表达； ②导入乙型血友病患者皮肤成纤维细胞（体外培养）→FⅨ表达； ③91年，导入乙型血友病患者皮肤成纤维细胞（体外培养）→回植病人皮下→FⅨ基因表达，FⅨ基表达水平达正常人的5%。 是我国基因治疗成功的例子。;3、黑色素瘤的基因治疗;例：细胞因子基因治疗和肿瘤坏死因子基因治疗;4、自杀基因的基因治疗;如： 自杀基因 +