微生物实验细菌培养接种.pptxVIP

第1页/共22页微生物实验细菌培养接种第2页/共22页检菌如无细菌生长（液体透明）即可应用调整酸碱度至pH 7.6分装，高压灭菌，15磅（121.3℃）15～20分钟过滤，补足失水重新校正pH一次基础培养基的制备去筋膜黄牛肉绞碎500g加入1000ml蒸馏水4℃浸泡过夜煮沸半小时直接煮沸2小时脱脂纱布过滤，按比例加入1％蛋白胨、0.5%NaCl，0.1%K2HPO4加热溶解补足水至1000ml第3页/共22页人体、物品中细菌检查材料：普通平板 （1份/组）钱手发衣盖上，标记 , 置 37℃，18-24h后观察。第4页/共22页飞沫、空气中细菌检查材料：血平板 （1份/组） 距口15—20cm用力咳嗽三次置空气中（避日光照射）30分钟飞 沫空 气盖上，标记 , 置 37℃，18-24h后观察。第5页/共22页结果观察——血平板金黄色葡萄球菌形成的β溶血现象也称为乙型溶血现象，属于完全溶血。表皮葡萄球菌在血琼脂平板培养基上形成不溶血的菌落。甲型溶血性链球菌形成的α溶血现象也称为甲型溶血现象或草绿色溶血现象，属于不完全溶血。第6页/共22页细菌培养接种法——平板划线法原始区域菌种：混合菌液材料：普通平板用具：接种环方法：分区划线1区2区4区3区第7页/共22页液体培养基斜面培养基半固体培养基 细菌培养接种法--斜面接种、液体接种、半固体菌种：大肠杆菌或葡萄球菌斜面材料：斜面、液体、半固体培养基用具：接种环、接种针第8页/共22页结果观察——普通平板普通琼脂平板培养基上，大肠埃希菌形成菌苔和菌落生长现象。注意：大小、颜色、透明度、凸起度、表面干燥或湿润、光滑或粗糙、边缘是否整齐及血平板上的溶血情况。第9页/共22页结果观察——液体培养基第10页/共22页结果观察——斜面培养基琼脂斜面培养基上大肠埃希菌形成的菌苔生长现象菌苔（mossy）指细菌生长繁殖后，在培养基 表面形成的一层培养物第11页/共22页结果观察——半固体培养基1、 扩散生长：具有动力的细菌,可见培养物扩散和培养基变混浊。即有鞭毛的细菌：由穿刺线向外扩散生长（羽毛状或云雾状）2、原位生长：没有动力的细菌，可见培养物没有扩散，培养基仍然澄清。即无鞭毛的细菌： 沿穿刺线生长 2 1 1 2第12页/共22页细菌代谢产物观察 细菌的酶不一样，对营养物质的分解能力不一样，产生的代谢产物也不一样。常见：糖发酵试验吲哚（indol）试验甲基红（methyl red）实验VP（Voges-Proskauer）试验枸橼酸盐利用（citrate utilization）试验尿素酶试验 硫化氢试验第13页/共22页糖发酵试验不同细菌分解糖类的能力和代谢产物不同。第14页/共22页 甲基红（methyl red）实验M - 甲基红（methyl red）实验葡萄糖→丙酮酸→乙酰甲基甲醇甲基红 -葡萄糖→丙酮酸 甲基红 +第15页/共22页吲哚（indol）试验I-吲哚（indol）试验色氨酸→吲哚→玫瑰吲哚 ↑ 对二甲基氨基苯甲醛 第16页/共22页枸橼酸盐利用试验C -枸橼酸盐利用（citrate utilization）试验利用枸橼酸盐生长+不能利用-第17页/共22页 硫化氢试验硫化氢试验（醋酸铅培养基）某些细菌分解含硫氨基酸，生成H2S，H2S遇铁盐（如硫化亚铁、醋酸铅等），则形成黑褐色硫化铁（铅）沉淀物，而呈黑色为（＋）。 第18页/共22页 尿素酶试验 产生氨使培养基变碱，指示剂显红色，为阳性。如：变形杆菌为阳性。第19页/共22页IMViC试验IMViC试验I - 吲哚（indol）试验M - 甲基红（methyl red）试验V - VP（Voges-Proskauer）试验C -枸橼酸盐利用（citrate utilization）试验 I M Vi C试验 大肠埃希菌+ + - - 产气杆菌 - - + + IMViC试验：是吲哚、甲基红、V-P以及枸橼酸盐利用试验四者的合称。常用于肠道杆菌的鉴定。第20页/共22页实验小结1、三类培养基液体培养基——用于增菌； 均匀混浊、沉淀、表面生长 半固体培养基——观察动力；保存菌种（6个 月）；穿刺线，扩散生长 固体培养基——分离纯化；保存菌种（1个月） 菌落、菌苔2、IMViC试验第21页/共22页第三次实验课内容1、热力对细菌和芽胞的杀菌作用2、紫外线的杀菌作用3、常用化学消毒剂的杀菌作用和抗生素敏感试验4、耐药性变异；5、细菌的鞭毛变异；6、高压灭菌器的使用；7、细菌的鉴定程序；8、全自动微生物分析仪的基本原理及简单操作步骤第22页/共22页感谢观看!