血清蛋白的分离.pptxVIP

第1页/共26页血清蛋白的分离第2页/共26页实验原理聚丙烯酰胺凝胶电泳是以聚丙烯酰胺凝胶为载体的一种区带电泳。该凝胶由丙烯酰胺（Acr）和交联剂N，N—甲叉双丙烯聚酰胺（Bis）聚合而成。聚丙烯酰胺凝胶电泳利用电泳和分子筛的双重作用分离物质。Acr和Bis单独存在或混合在一起时是稳定的，但在具有自由基团体系时就能聚合。引发自由基团的方法有化学法和光化学法两种。化学法的引发剂是过硫酸胺（Ap），催化剂是四甲基乙二胺（TEMED）；光化学法是以光敏感物核黄素来代替过硫酸胺，在紫外光照射下引发自由基团。第3页/共26页聚丙烯酰胺凝胶电泳的凝胶体系有连续和不连续电泳之分。不连续电泳系统由浓缩胶和分离胶两种胶体组成，两种胶体分别由不同的pH 的缓冲液和胶贮液配制而成，形成孔径不同的两种胶体。不连续电泳系统电泳分离过程中包括三种物理效应，即样品的浓缩效应、电泳分离的电荷效应和凝胶的分子筛效应。本次试验采用不连续电泳系统PAGE，通过三种效应将血清中各蛋白质组分按其分子大小、电荷多少不同进行分离。第4页/共26页聚丙烯酰胺凝胶电泳有圆盘电泳和垂直板电泳之分，但两者的原理完全相同，只是所用的电泳槽不同。由于时间问题，本次试验将分两组进行，一组使用圆盘，一组使用垂直板。第5页/共26页实验仪器夹心式垂直板电泳槽，圆盘电泳槽，电泳仪，直流稳压电源，玻璃板（13×13），注射器及微量注射器抽气泵，干燥