实验三酵母核酸的制备及成份鉴定.pptVIP

实验三酵母核酸的制备及成份鉴定 第一页，共十页，2022年，8月28日 一、目的 了解核酸的组分，并掌握鉴定核酸组分的方法以 了解苔黑酚定量测定RNA的方法。 第二页，共十页，2022年，8月28日 二、原理 酵母核糖核酸中RNA含量较多，RNA可溶于碱性溶液，在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀，即得到RNA的粗制品。 核糖核酸中含有核糖、嘌呤碱，嘧啶碱和磷酸各组分，加硫酸煮沸可使其水解，从水解液中可以测出上述组分的存在。 第三页，共十页，2022年，8月28日 1.磷酸 磷酸与钼酸铵试剂作用生成黄色磷钼酸，磷钼酸中的钼在有还原剂（Vc）存在时可被还原成蓝色的钼蓝。根据此呈色反应即可鉴定磷酸的存在。 2.嘌呤碱 根据嘌呤碱能与硝酸银产生灰褐色的絮状嘌呤银化合物而鉴定。 第四页，共十页，2022年，8月28日 3.戊糖 根据核糖经浓盐酸或浓硫酸作用则生成糠醛，后者能与3，5二羟甲苯缩合而形成绿色化合物而鉴定。 脱氧核糖在浓酸中生成ω-羟基-γ-酮基戊醛，它和二苯胺作用生成蓝色化合物。 第五页，共十页，2022年，8月28日 三、器材 锥形瓶 大研钵 电子天平 离心机 恒温水浴锅 注意仪器使用方法 离心管平衡!! 第六页，共十页，2022年，8月28日 四、试剂和材料 酵母粉 0.04 M NaOH,95%乙醇,1.5 M H2SO4溶液,浓氨水,0.1M AgNO3 酸性乙醇溶液：30ml95%乙醇加0.3ml浓盐酸混匀。 苔黑酚--FeCl3溶液：将100 mg苔黑酚溶于100ml浓HCl中,再加入100mgFeCl3.6H2O，临用时配制。 定磷试剂： 按顺序以A：B：C：蒸馏水＝1：1：1：2（V/V）混匀,现配。A、17% H2SO4：　将17ml浓硫酸缓缓加入83ml水中。B、2.5%（NH4）6Mo7O24：2.5g（NH4）4Mo2O7溶于100ml蒸馏水中。C、10%Vc：10g Vc溶于100ml蒸馏水中，用棕色瓶贮存。颜色呈淡黄色时可以使用，如呈深黄或棕色则失效。 第七页，共十页，2022年，8月28日