第三节蛋白质的结构.pptVIP

影响α—螺旋形成的因素： 一条肽链能否形成α—螺旋，以及形成的螺旋是否稳定，与它的氨基酸组成和序列有极大的关系。 R基大（如Ile）不易形成α—螺旋，脯氨酸中止α—螺旋。 R基较小，且不带电荷的氨基酸利于α—螺旋的形成。如多聚丙氨酸在pH7的水溶液中自发卷曲成α—螺旋。 当前第62页\共有92页\编于星期五\22点 （二） ?-折叠（β-pleated sheet） ?-折叠是由两条或多条几乎完全伸展的肽链平行排列，通过链间的氢键交联而形成的。肽链的主链呈锯齿状折叠构象。 当前第63页\共有92页\编于星期五\22点 ①在?-折叠中，?-碳原子总是处于折叠的角上，氨基酸的R基团处于折叠的棱角上并与棱角垂直，两个氨基酸之间的轴心距为0.35nm。 ② ?-折叠结构的氢键主要是由两条肽链之间形成的；也可以在同一肽链的不同部分之间形成。几乎所有肽键都参与链内氢键的交联，氢键与链的长轴接近垂直。 当前第64页\共有92页\编于星期五\22点 3）?-折叠有两种类型。一种为平行式，即所有肽链的N-端都在同一边。另一种为反平行式，即相邻两条肽链的方向相反。 当前第65页\共有92页\编于星期五\22点 ④测定每条多肽链的氨基酸组成，并计算出氨基酸成分的分子比； ⑤分析多肽链的N-末端和C-末端 末端氨基酸的测定：多肽链端基氨基酸分为两类，N-端氨基酸和C-端氨基酸。在肽链氨基酸顺序分析中，最重要的是N-端氨基酸分析法。 当前第30页\共有92页\编于星期五\22点 末端氨基酸测定的主要方法有： A. 二硝基氟苯（DNFB）法 B. 丹磺酰氯法:在碱性条件下，丹磺酰氯（二甲氨基萘磺酰氯）可以与N-端氨基酸的游离氨基作用，得到丹磺酰-氨基酸。此法的优点是丹磺酰-氨基酸有很强的荧光性质，检测灵敏度可以达到1?10-9mol。 当前第31页\共有92页\编于星期五\22点 Edman 降解法 苯异硫氰酸 当前第32页\共有92页\编于星期五\22点 当前第33页\共有92页\编于星期五\22点 丹磺酰氯法 荧光 当前第34页\共有92页\编于星期五\22点 C. 肼解法：此法是多肽链C-端氨基酸分析法。多肽与肼在无水条件下加热，C-端氨基酸即从肽链上解离出来，其余的氨基酸则变成肼化物。肼化物能够与苯甲醛缩合成不溶于水的物质而与C-端氨基酸分离。 当前第35页\共有92页\编于星期五\22点 D. 氨肽酶法：氨肽酶是一种肽链外切酶，它能从多肽链的N-端逐个的向里水解。根据不同的反应时间测出酶水解所释放出的氨基酸种类和数量，按反应时间和氨基酸残基释放量作动力学曲线，从而知道蛋白质的N-末端残基顺序。 最常用的氨肽酶是亮氨酸氨肽酶，水解以亮氨酸残基为N-末端的肽键速度最大。 当前第36页\共有92页\编于星期五\22点 E. 羧肽酶法：羧肽酶是一种肽链外切酶，它能从多肽链的C-端逐个的水解。 根据不同的反应时间测出酶水解所释放出的氨基酸种类和数量，从而知道蛋白质的C-末端残基顺序。 目前常用的羧肽酶有四种：A，B，C和Y；A和B来自胰脏；C来自柑桔叶；Y来自面包酵母。羧肽酶A能水解除Pro，Arg和Lys以外的所有C-末端氨基酸残基；B只能水解Arg和Lys为C-末端残基的肽键。 当前第37页\共有92页\编于星期五\22点 ⑥多肽链断裂成多个肽段，可采用两种或多种不同的断裂方法将多肽样品断裂成两套或多套肽段或肽碎片，并将其分离开来。 当前第38页\共有92页\编于星期五\22点 多肽选择性降解的方法有： 酶解法：胰蛋白酶，糜蛋白酶，胃蛋白酶，嗜热菌蛋白酶，羧肽酶和氨肽酶。 化学法：溴化氰水解法，它能选择性地切割由甲硫氨酸的羧基所形成的肽键。 当前第39页\共有92页\编于星期五\22点 溴化氰水解法，它能选择性地切割由甲硫氨酸的羧基所形成的肽键。 溴化氰基锍 甲基硫氰酸 Br- Br- 当前第40页\共有92页\编于星期五\22点 ⑦测定每个肽段的氨基酸顺序。 ⑧确定肽段在多肽链中的次序：利用两套或多套肽段的氨基酸顺序彼此间的交错重叠，拼凑出整条多肽链的氨基酸顺序。 当前第41页\共有92页\编于星期五\22点 所得资料： N-末端残基H C-末端残基S 第一套肽段 第二套肽段 OUS SEO 　PS WTOU 　EOVE VERL RLA