3种不同规模化培养模式对湛江等鞭金藻生产力及色素含量的影响.docx

? ? 3种不同规模化培养模式对湛江等鞭金藻生产力及色素含量的影响 ? ? 吕 布,杨守国,VASQUEZ Hebert Ely,王爱民,郑 兴,顾志峰 (1 海南大学海洋学院，海南 海口 570228; 2 海南大学南海海洋资源利用国家重点实验室,海南 海口 570228;3 海南省海洋与渔业科学院，海南 海口 571126) 湛江等鞭金藻(Isochrysiszhanjiangensis)是一种重要的水产经济微藻，具有个体小、繁殖快、营养丰富、运动速度适中、不含纤维素细胞壁等特点，易被水生动物幼虫捕捉吞食和消化吸收，常作为海产经济双壳类等动物幼虫的基础饵料[1-3]。 微藻一般分为室内和室外两种养殖方式。室内环境下，主要通过5 L或更小的锥形瓶为培养容器进行培养，主要特点为精细化培养，但培养规模较小，一般作为一级藻种培养的开展模式。室外环境下，主要以容积300 L以上的容器进行培养，如玻璃钢桶、水泥池，主要特点是培养规模大，但精细化程度较低、易污染[4-5]。水产生产活动中所使用的微藻饵料基本是通过室外开放式规模化生产所得，该生产方式一般为一次性生产，易发生污染、倒藻现象，继而影响效益[6]。 室外光生物连续培养器近年来受到微藻生产企业的推崇，其主要特点是可进行连续性高密度培养，不易污染，可规模化生产[7-8]。室外光生物连续培养器具有可高效生产、所获微藻生物质量较高、土地使用面积效率相对较高等特点，使其成为可代替水泥池等占地面积大的微藻传统养殖模式的有效手段之一[9-11]。室外光生物连续培养器作为新型培养模式，相对聚乙烯桶、水泥池等传统模式的相关工作要求较高，如对操作者也具有一定管理技术要求，传统养殖户因对其不了解而不敢轻易接受并进行生产尝试[12]。关于室外光生物连续培养器与目前生产上常用的聚乙烯桶、水泥池等模式之间的生产效率和质量的比较研究报道则更为少见，因此使得新技术在养殖户中的推广工作变得缓慢。 本研究以湛江等鞭金藻为研究对象，比较探究了管道式光生物反应器养殖模式与传统微藻室外规模化养殖模式(聚乙烯桶和水泥池)生产力及生产效果之间的详细差异，以期为微藻生产新模式的推广及技术优化奠定理论基础。 1 材料与方法 1.1 材料 所用湛江等鞭金藻(Isochrysiszhanjiangensis)来源海南大学海洋学院微藻保种室。试验前将藻种进行纯化扩培，取快速生长期的藻液开展室外培养试验。所用培养液为本课题组基于“宁波3#微藻培养液” 而进一步优化所得，具体配方为：化肥尿素 50 mg、NaH2PO410 mg、 FeSO42.5 mg、MnSO40.25 mg、EDTA-2Na 10 mg、VB16× 10-3mg、VB120.5×10-6mg、过滤海水1 L。 试验所用水体为经过沙井过滤、沉淀、漂白水消毒后的自然海水。室外培养过程中的温度、光照强度、湿度、光周期等理化条件为自然条件。 1.2 试验设计 试验在 3 种不同的养殖模式中进行(图1)。聚乙烯桶的工作体积约 1 000 L；传统水泥池工作体积约 3 000 L；管道式光生物反应器工作体积约 2 000 L，其中管道式光生物反应器的供气系统由泵、输气管、调节阀组成。试验充气量基本统一控制为 20 L/min；接种细胞密度约为10.0×104cells/mL。光照为正常自然条件。 图1 试验所用微藻室外规模化培养模式 试验组别接入藻种混匀后，每隔24 h进行取样，进行藻类细胞数目、干重、色素含量、总蛋白含量及可溶性糖含量指标的检测。 1.3 检测指标及方法 (1)藻细胞数目的测定。采用血球计数板法进行测定[13]。 (2)藻细胞干重的测定。预先称重烘干Whatman GF/C过滤膜，将一定体积的藻液在该膜上过滤，经过冲洗除营养盐后，放到105 ℃烘箱中烘干72 h以上后称重，直至前后两次质量差不超过2 mg，然后计算两者的差值代表干重[14]。 (3)藻细胞内生物质的测定。 ①叶绿素含量：利用丙酮萃取法提取微藻体内叶绿素，取待测藻液样品 20 mL，通过抽滤于Whatman GF/C膜上，随后用镊子将Whatman GF/C膜取下置于50 mL离心管底部，加入10 mL的90 %丙酮溶液，立即放入4 ℃冰箱中避光保存24 h以上(1～3 d均可)，黑暗低温条件下进行萃取。萃取后在4 ℃，4 000 r/min条件下离心10 min，将离心后的提取液上清液小心注入1 cm比色皿，以90 %丙酮溶液作参比，分光光度计(岛津UV-1700)分别测定在波长630、647、664 nm处溶液的吸光度值并记录,减去波长750 nm下测得的吸光度值，得到校正后的E664、E647、E630值。按照以下的方程式计算叶绿素a(Cchla)、叶绿素b(Cchlb)和总叶绿