卡铂威猛甲氨蝶呤联合甲氨蝶呤对脑胶质瘤抑制作用的研究.docxVIP

卡铂威猛甲氨蝶呤联合甲氨蝶呤对脑胶质瘤抑制作用的研究 从2004年5月到2004年9月，我们使用药物敏感实验来选择对脑骨干瘤细胞敏感的药物。考虑到肿瘤细胞的动态和药物特性，我们观察了kapt（cbp）、威姆（vm-26）、甲胺色胺（mtx）和尼莫地平（nim）对脑骨干瘤细胞的抑制作用。探讨了脑骨干瘤与脑骨干瘤细胞的敏感性。 1 1.1 病理组织学检测 本文40例脑胶质瘤 (初诊32例, 复发8例) 患者, 其诊断均经病理证实。其中星形细胞瘤28例 (Ⅰ级3例, Ⅱ级8例, Ⅲ级15例, Ⅳ级2例) , 室管膜瘤8例 (Ⅰ级1例, Ⅱ级2例, Ⅲ级5例) , 少突胶质细胞瘤4例 (Ⅱ级3例, Ⅲ级1例) 。 1.2 药物配制及配制 CBP、Vm-26、MTX、NIM以常用药物剂量计算出血浆浓度作为体外浓度依据, 或根据公式:实验药物浓度 (μg/ml) =mg (临床常用剂量) ×平均体表面积×100/平均体重×60。将药物用生理盐水或5%葡萄糖水配制成母液, 再用培养液配制成不同浓度梯度, 一般设5个对数级浓度。主要试剂包括四氮唑盐 (MTT) 试剂 (Sigma公司) 用PBS溶解, 配制成5mg/ml工作液, -20℃保存;完全培养液BPMI-1640 (Gibco公司) 内含10%胎牛血清 (Hycloo公司) ;二甲基亚砜 (DMSO) 试剂 (Sigma公司) 分析醇。 1.3 药物敏感性检测 1.3.1 脑胶质瘤单细胞悬液配制 无菌条件下, 将术中未烧灼的肿瘤组织用Hank’s液漂洗2次, 用眼科剪将组织剪为1mm×1mm×1mm组织块, 加入0.25%胰蛋白酶消化, 离心, 经过150目细胞筛过滤。用Hank’s液漂洗2次, 制成单细胞悬液, 用锥虫蓝测试细胞活性, 肿瘤细胞活性在95%以上。加入RPMI-1640含10%胎牛血清, 调整细胞为5×10 1.3.2 药物敏感性筛选实验 采用MTT法筛选出药物敏感浓度。取无菌96孔培养板, 每孔加细胞悬液20μl, 实验组加不同药物工作液20μl, 药物联合组各加工作液20μl, 每个药物浓度重复6孔, 各孔用含10%胎牛血清的RPMI-1640的培养液补充至200μl, 并设对照组及调零孔, 置37℃, 5%CO 1.3.3 药物对脑胶质瘤细胞 1.3.4 统计学方法 所得数据均以 2 2.1 药物半限制浓度的筛选 MTT法筛选实验结果表明, 各化疗药物对脑胶质瘤细胞的IC 2.2 im、vm-26+nim、mtx+nim对脑胶质瘤增殖的抑制作用 NIM与各化疗药物联合 (CBP+NIM、Vm-26+NIM、MTX+NIM) 对脑胶质瘤增殖的抑制作用明显高于CBP、Vm-26、MTX单用者 ( 3 病例生存期和死亡率高 脑胶质瘤具有治疗困难、生存期短、死亡率高的特点, 患者平均生存期为6~10个月, 1年生存率仅为30%, 5年低于5.5%