EZH2、GLUT-1联合DNA-ICM检测在胸腔积液中鉴别良恶性间皮病变的价值.docx

? ? EZH2、GLUT-1联合DNA-ICM检测在胸腔积液中鉴别良恶性间皮病变的价值 ? ? 殷晓伟 杨玉柱 贾贺 徐雪房 黄政 许艳梅 胸水脱落细胞学鉴别恶性间皮瘤(Malignant mesothelioma， MM)与反应性间皮细胞增生(Reactive mesothelial hyperplasia， RMH)的难点在于形态上瘤细胞存在重叠，而侵犯邻近组织等组织学特点在细胞学标本中无法观察，此时增加细胞块切片辅助免疫细胞化学染色可有效提高MM的诊断准确率，所以寻找一组可靠的免疫标记物尤为重要。随着细胞DNA-ICM技术被广泛应用，使肿瘤的研究提高到了定量分析水平[1]，近年来，因其特异性强且准确度高的优点，在宫颈癌及乳腺癌的临床诊断中具有较高的应用价值[2-4]。已有学者提出DNA-ICM技术在恶性胸水的诊断中有较高的灵敏度[5]，可能为良恶性浆膜腔积液的鉴别提供一种新的诊断思路。本文分别探讨免疫细胞化学技术及细胞DNA-ICM技术的诊断价值，进一步分析联合应用对浆膜腔积液内MM的诊断价值。 资料与方法 一、研究对象 收集山东省单县中心医院2014年1月—2019年12月间经组织学证实的胸水病例共50例，其中MM 30例，男性12例，女性18例，年龄39～74例(中位年龄62岁)；RMH 20例，男性13例，女性7例，年龄45～77岁(中位年龄65岁)。所有病例均有组织病理证实诊断准确。 二、研究方法 将新鲜胸水制备细胞涂片两张，一张室温下瑞氏-吉姆萨染色在光学显微镜下分析，一张行改良Feulgen DNA染色，用于DNA定量扫描分析，其余标本离心后经全自动脱水机处理后，石蜡包埋制成做细胞块用于免疫细胞化学检测。 三、判定标准 免疫细胞化学联合检测判定标准：EZH2、GLUT-1任意一项检测阳性即为阳性。 DNA倍体分析结果判定标准：系统将扫描细胞自动分类并计数，同时通过测定细胞核的积分光密度来判断DNA的相对含量，DNA含量的大小描述为 DNA 指数( DNA index，DI)，正常细胞DI值为1，当DI2. 5为异倍体细胞，且异常细胞数≥3个为阳性，DI≤2.5者为阴性[6]。 四、统计学方法 用SPSS 25.0统计软件进行统计分析，计数资料以例数、百分比表示，比较采用卡方检验，以P0.05为差异有统计学意义。 结 果 一、免疫细胞化学检测EZH2、GLUT-1在胸腔积液中的表达情况 EZH2阳性定位于细胞核，在30例MM中(见图1A)阳性表达率为83%，20例RMH中(见图1B)阳性表达率为25%，EZH2在MM与RMH中的表达差异有统计学意义(P0.05)。GLUT-1阳性定位于细胞膜，在30例MM中(见图2A)阳性表达率为70%，20例RMH中(见图2B)无阳性表达，差异有统计学意义(P0.05)(见表1)。 图1 EZH2的表达情况 SP×200 图2 GLUT-1的表达情况 SP×200 表1 免疫细胞化学检测EZH2、GLUT-1在胸腔积液中的表达情况 二、EZH2和GLUT-1联合检测在胸水MM中的诊断价值 EZH2、GLUT-1对MM诊断的灵敏度分别为80%、70%，特异度分别为73%、72%，当EZH2、GLUT-1联合检测时，对MM诊断的灵敏度为93%，差异有统计学意义(P0.05)，特异度为86%，差异有统计学意义(P0.05)(见表2)。 表2 联合检测 EZH2、GLUT-1对胸腔积液内MM诊断的灵敏度和特异度 三、DNA定量分析结果 50例样本，经活检组织证实其中MM 30例，DNA扫描诊断27例，RMH 20例，经DNA扫描诊断16例，DNA倍体分析符合率和阳性检出率分别为86%(43/50)、90%(27/30)(见图3，4)。 图3 一例恶性间皮瘤胸水标本DNA定量分析检测 四、各种检查方法灵敏度及特异度的比较 免疫细胞化学技术检测EZH2及GLUT-1在MM诊断的灵敏度、特异度分别为93%，86%，DNA定量分析的灵敏度及特异度分别为90%、80%，联合应用免疫细胞化学技术及DNA定量分析敏感度为97%，特异度为75%(见表3)。 表3 各种检查方法灵敏度及特异度[n(%)] 讨 论 浆膜腔积液是MM常见的首发症状，并且样本的获取相对安全，操作简单易行，因此细胞学检查对于MM的诊断具有无法取代的优势。当病变的间皮性质明确时，MM与RMH的鉴别是病理医师需要面临的重大挑战，虽然RMH是良性病变，但有时与MM的细胞学特征重叠，仅涂片和常规染色难以鉴别诊断[7-8]，因此寻找一种有效的生物标记物尤为重要。本课题前期实验结果提示EZH2及GLUT-1抗体组合在组织病理中是区分MM与RMH的有效生物标志物[9]，故推测在浆膜腔积液细胞学诊断中亦具有一定的价值。 图4 一例反