拟态弧菌金属蛋白酶基因PrtV_缺失株的构建及生物学特性分析.docxVIP

微生物学通报 Microbiology China /wswxtbcn Jul. 20, 2023, 50(7): 2848?2859 DOI: 10.13344/j.microbiol.china.220968 Copyright ?2023 Microbiology China All Rights Reserved 研究报告 研究报告 拟态弧菌金属蛋白酶基因 PrtV 缺失株的构建及生 物学特性分析 向菲 1， 田子琦 1， 冯杨 1， 秦振阳 1， 彭焜 1， 欧阳萍 1， 陈德芳 2， 黄小丽 2， 耿毅*1 1 四川农业大学动物医学院，四川 成都 611130 2 四川农业大学动物科技学院， 四川 成都 611130 向菲 向菲, 田子琦, 冯杨, 秦振阳, 彭焜, 欧阳萍, 陈德芳, 黄小丽, 耿毅. 拟态弧菌金属蛋白酶基因 PrtV 缺失株的构建及生物学 特性分析[J]. 微生物学通报, 2023, 50(7): 2848-2859. XIANG Fei, TIAN Ziqi, FENG Yang, QIN Zhenyang, PENG Kun, OUYANG Ping, CHEN Defang, HUANG Xiaoli, GENG Yi. Construction and biological characterization of Vibrio mimicus’s metalloprotease gene PrtV-deletion strain[J]. Microbiology China, 2023, 50(7): 2848-2859. 摘 要： 【背景】研究发现 PrtV 基因编码含多囊肾病(polycystic kidney disease)结构域的金属蛋白 酶，其在多种细菌的致病过程中具有重要作用。拟态弧菌是一种感染多种水生动物的重要病原 菌， PrtV 基因在拟态弧菌致病中的作用尚不清楚。【目的】探究 PrtV 基因对拟态弧菌致病相关生 物学特性的影响。【方法】采用自然转化的方法构建拟态弧菌 PrtV 基因缺失株(ΔPrtV)，同时通过 基因与质粒重组后电转化导入缺失株构建回补株(ΔPrtV/pPrtV)，对突变株的生长特性、生化特 征、生物被膜形成、自聚集能力、胞外产物卵磷脂酶和蛋白酶活性， 以及致病性和细胞毒性等进 行分析。【结果】与野生株相比， 缺失株的生长特性、生物被膜形成、自聚集能力和卵磷脂酶活 性无变化， 但分解尿素、甘氨酸、香豆酸盐、鸟氨酸和赖氨酸的理化特性改变； 胞外产物蛋白酶 活性显著降低(P0.05)，细胞毒性显著下降(P0.05)，对杂交鲇的致病力下降 10 倍。【结论】PrtV 基因与拟态弧菌的细胞毒性及致病性等多种生物学特性有关。该结果为进一步解析拟态弧菌 PrtV 基因功能及其致病机制提供了依据。 关键词： 拟态弧菌； PrtV 基因； 自然转化；基因缺失；生物学特性 资助项目：四川省淡水鱼产业技术体系创新团队建设项目(SCCXTD-15-23)；四川省应用基础项目(21YYJC2011) This work was supported by the Sichuan Province Freshwater Fish Industry Technology System Innovation Team Construction Project (SCCXTD-15-23) and the Sichuan Province Application Fundamental Project (21YYJC2011). *Corresponding author. E-mail: 12322@ Received: 2022-10-02; Accepted: 2022-12-24; Published online: 2023-02-03 向菲等: 拟态弧菌金属蛋白酶基因 PrtV 缺失株的构建及生物学特性分析 2849 Construction and biological characterization of Vibrio mimicus’s metalloprotease gene PrtV-deletion strain XIANG Fei1, TIAN Ziqi1, FENG Yang1, QIN Zhenyang1, PENG Kun1, OUYANG Ping1, CHEN Defang2, HUANG Xiaoli2, GENG Yi*1 1 College of Veterinary Medicine, Sichuan Agric