DB32T 4139-2021小麦赤霉病菌对常用杀菌剂抗性监测.docxVIP

ICSFORMTEXT65.020.20 FORMTEXTCCS B 22 FORMTEXT????? DBFORMTEXT32 FORMTEXT江苏省地方标准 DB FORMTEXT32/ T 4139—FORMTEXT2021 FORMTEXT????? FORMTEXT小麦赤霉病菌抗药性监测技术规程 FORMTEXTTechnical regulation for monitoring of fungicide resistance in Fusarium spp. causing wheat head blight FORMTEXT????? FORMTEXT????? FORMTEXT2021 - 11 - 04发布 FORMTEXT2021 - 12 -04实施 FORMTEXT江苏省市场监督管理局???发布 DB32/T 4139-2021 PAGE 4 小麦赤霉病菌抗药性监测技术规程 1 范围 本文件规定了小麦赤霉病菌抗药性监测对象、敏感性基线确定、采样与分离、敏感性测定等技术要求。 本文件适用于小麦赤霉病菌对常用杀菌剂抗性监测。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 NY/T 1156.1—2006 农药室内生物测定试验准则 杀菌剂第1部分：抑制病原真菌孢子萌发试验 凹玻片法 NY/T 1156.2—2006农药室内生物测定试验准则 杀菌剂第2部分：抑制病原真菌菌丝生长试验 平皿法 NY/T 1859.1 农药抗性风险评估第1部分：总则 NY/T 1859.6 农药抗性风险评估第6部分：灰霉病菌抗药性风险评估 3 术语和定义 NY/T 1859.1和NY/T 1859.6界定的以及下列术语和定义适用于本文件。 3.1 区分剂量 critical concentration 能够鉴别抗药性菌株和敏感菌株的药剂浓度。 4 监测对象 监测对象包括： a) 苯并咪唑类杀菌剂：多菌灵、甲基硫菌灵 b) 麦角甾醇生物合成抑制剂：戊唑醇、丙硫菌唑、叶菌唑、丙环唑、三唑酮、咪鲜胺、己唑醇、氟环唑、苯醚甲环唑 c) 甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂：嘧菌酯、吡唑醚菌酯、醚菌酯、烯肟菌酯、肟菌酯 d) 琥珀酸脱氢酶抑制剂：氟唑菌酰羟胺、萎锈灵 e) 肌球蛋白抑制剂：氰烯菌酯 f) 多作用位点杀菌剂：福美双、百菌清 5 敏感性基线确定 按照NY/1859.6执行。 6 采样与分离 6.1 采样 小麦收获前在多个代表性监测点采集赤霉病发病的麦穗，或在小麦抽穗前20至25天采集含病残体的稻桩。采集的每个样本分别装入1个纸质信封，并记录采样人及联系方式、采样的小麦品种、用药情况及地点（省、市县、乡镇、村、组、农户）。做好记录并将样品晾干防止霉变。 6.2 分离 挑取稻桩上的病残体或麦穗上的病麦粒，放在含有50 μg/mL五氯硝基苯和100 μg/mL硫酸链霉素的马铃薯葡萄糖琼脂（PDA，Potato Dextrose Agar）平板上，分离小麦赤霉病菌。 7 敏感性测定 7.1 药剂配制 将有效含量90%以上的杀菌剂原药溶解在合适的溶剂中，制成10 mg/mL的母液，现配现用。 7.2 测定方法 7.2.1 菌丝生长速率测定法 本方法适用于监测对所有登记药剂的抗药性。将分离的小麦赤霉病菌接种至含区分剂量药剂培养基上，25℃黑暗培养3天，观察菌株生长情况，能生长的即为抗性菌株，不生长的即为敏感菌株。具体步骤按照NY/T 1156.2—2006。 7.2.2 孢子萌发测定法 本方法适用于监测对甲氧基丙烯酸酯类和琥珀酸脱氢酶抑制剂类杀菌剂的抗药性。制备各菌株的分生孢子或子囊孢子，用无菌水稀释至约104-5个/mL孢子液，吸取100 μL孢子液均匀涂布在含有不同药剂浓度的水琼脂平板上，在25oC下黑暗培养6至8小时（对照萌发95%时），显微镜下检查孢子的萌发率（芽管长度达孢子宽度的1/2即为萌发），计算各菌株的EC50值和抗药性指数。具体步骤按照NY/T 1156.1—2006。 7.2.3 LAMP高通量测定法 本方法适用于监测因小麦赤霉病菌β2-Tubulin的F167Y基因型突变引起的多菌灵抗性。根据LAMP扩增产物的颜色可判定菌株是否为多菌灵抗性，具体技术方法按照附录A执行。 8 抗药性评价 8.1 抗药性频率及风险评价 抗药性频率（%）=抗药性菌株数/测定菌株数?100。抗药性频率5%以下，为低等风险；抗药性频率为5%～10%为中等风险；抗药性频率10%以上为高等风险。 8.2 影响抗药性风险的其