基因药物课件.pptxVIP

基因药物;; 在未形成概念前，20世纪70年代就开始临床实验，由于实验未取得成果，而且没有得到NIH的批准，广受抨击。 80年代，在动物身上进行了大量试验，为其临床应用奠定了基础。 1990年9月，临床实验正式开始。患者是一名患严重联合免疫缺陷症的年轻姑娘，她从父母处各继承了一个缺陷的ada基因，造成体内缺乏腺苷酸脱氨酶。 我国复旦大学的薛京伦研究小组，做了世界上首例血友病 Ｂ 基因治疗。;;; 2002年10月,一名法国男孩在接受试验性基因治疗后罹患白血病，而基因治疗很可能是白血病发病的原因。 Fisher说，他非常希望这种基因治疗方法从总体而言利大于弊。除基因治疗之外，治疗SCID的另一种治疗方法是近亲的骨髓移植。除非骨髓移植非常匹配，否则手术的失败率是25%。他强调说，这一失败率比现在接受基因治疗的11例患者的并发症发生率高2倍以上。 ;;;基因治疗的两种形式;2、基因治疗的方式;3、导入的方式;体内导入（in vivo） 外源基因直接导入体内有关的组织细胞 使其进入相应的细胞 并表达 ;基因治疗的基本程序;目前临床试验的治疗基因： 合适的能达到治疗/预防的目的基因的cDNA 目的基因的cDNA的获得 cDNA文库中目的基因的克隆 人工合成基因片段 PCR法筛选扩增目的基因 ;三、载体系统--运送基因的工具;逆转录病毒载体; 逆转录病毒的生活周期 进入宿主细胞 双链RNA 逆转录酶 双链DNA前病毒 整合到宿主细胞基因组DNA中 宿主细胞RNA聚合酶II mRNA 病毒RNA基因组 作为合成相应 病毒蛋白质的模板 包装成新的病毒颗粒，离开宿主;逆转录病毒载体的构建;假病毒颗粒的产生;腺病毒DNA 载体的特点 基因重排低 外源基因于病毒DNA重组后能稳定复制几个周期 安全性能好 不整合人的染色体DNA，不会导致恶性肿瘤 宿主范围广 对受体细胞是否处于分裂期要求不严格 使用效果好 外源基因在载体上容易高效表达 ;3、腺相关病毒（adeno associated virus，AAV） 属于细小病毒科，其成熟病毒颗粒中有的含正链DNA，有的含负链DNA。不能???立繁殖，其繁殖依赖于辅助病毒（腺病毒或疱疹病毒）。基因组仅5kb，有两个ORF，5’和3’端各有一个由145个氨基酸组成的反向重复序列（ITR），对病毒的复制、整合、包装等有重要调控作用。;优点： 1)、反向末端重复序列中没有转录调控元件，减少激活原癌基因的可能性 2）、宿主广，只能形成慢性感染 3）、可发生位点特异性整合，有利于表达 4）、热稳定性好，而作为辅助病毒的腺病毒在60℃即被灭活 5）、安全性较好，本身不致病;4、单纯疱疹病毒（herpes simple virus，HSV） 双链DNA病毒，基因组大小152kb，可缺失多个基因仍保持复制能力。 特点： 1）、序列清楚 2）、可容纳至少30kb外源基因 3）、宿主广，可侵染脊椎动物各种细胞 4）、重组病毒培养过程中易得到较高滴度 5）、从外周进入神经系统，不影响神经元功能 但表达产物对多种类型宿主有毒性，且可引起严重免疫反应，要进入临床仍需改进;5、 痘病毒载体 痘苗病毒为线形双链的有包膜病毒, 其核心颗粒不依赖宿主细胞而独立引进转录和复制,宿主范围广泛，易于培养；痘苗病毒基因组中大量非必需基因的缺乏并不影响其在宿主细胞的复制能力,可允许在同一或不同非必需区插入多个基因 痘苗病毒缺点是载体对细胞的毒性,同时病毒能被人体的补体系统灭活并降解;表 常用病毒载体得特征和适用范围;四、靶细胞;3、皮肤 表皮涂抹或肤内注射裸露DNA活脂质体包裹DNA。安全、简便，易行，但皮肤不断更替。 4、其他 如肝细胞、静脉注射等。;五、转移方法;2、物理法 直接注射法，显微注射法，电穿透法等 3、病毒介导 目前最常用和最成熟的方法;六、基因治疗的临床试验;治疗性试验;遗传疾病; 遗传性单基因疾病;腺苷脱氨酶(ADA)缺乏的严重联合免疫缺陷(SCID);治疗基本步骤:;;恶性肿瘤的细胞因子基因治疗;策略b： 引入抑瘤基因，如p53基因 今又生（Gendicine）是世界上第一个获得批准临床使用的抗肿瘤基因药，由正常人肿瘤抑制基因p53?和改构的5型腺病毒基因重组而成。 通常